[发明专利]一种猪源益生菌复合物的制备和应用

权利要求书

1.一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述益生菌复合物成分包括枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌；复合物制备步骤如下：

步骤a、将枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌活化后，菌液浓度达到对数生长期1-2×10⁹cfu/ml；

步骤b、将步骤a所得的菌液离心，弃上清液，收集菌泥；

步骤c、将上述菌泥和保护剂按质量比1：2～5混合均匀，搅拌使保护剂充分与菌体接触，在﹣20℃～-50℃、50-80Pa条件下冷冻干燥成粉制剂，即得益生菌复合物。

2.根据权利要求1所述一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述步骤c中保护剂大豆皂苷、海藻糖和L-盐酸半胱氨酸，其按重量分数比为1：(1～5)：(0.5～3)。

3.根据权利要求1所述一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述益生菌复合物来源于猪肠道，并经过分离、训化制备得到。

4.根据权利要求3所述一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述益生菌复合物从猪肠道的分离步骤包括：

步骤A、从健康猪肠道取一定量内容物，加入生理盐水，以220r/min速度摇床震荡30min，得到第一混悬液，再取上述混悬液加入生理盐水稀释、摇床震荡，重复以上稀释过程5-8次，取最终稀释混悬液1mL加至碳酸钙MRS培养基中，37℃温度下培养48h，得到益生菌MRS培养液；

步骤B、取上述益生菌MRS培养液，以600w 450MHz微波炉辐照30s，得第二混悬液，取第二混悬液0.1～20mL，加至碳酸钙MRS培养基37℃培养48h，重复以上辐照和培养5～15次，得到最终辐照后混悬液；

步骤C、再取上述最终辐照后混悬液加入生理盐水，混匀，加至碳酸钙MRS培养基37℃培养48h，重复以上辐照和培养过程3～6次，分别吸取10^-5、10^-6、10^-7三个稀释梯度的混悬液，分别与冷却至45℃含有碳酸钙MRS培养基混合均匀，待其完全凝固，37℃培养48h；从接种三种浓度混悬液的细菌培养物中选取边缘整齐且有明显溶钙圈或表面褶皱凸起的单个菌落，革兰氏染色镜检；

步骤D、将革兰氏染色镜检检测出的阳性杆菌接种于MRS固体培养基，37℃培养48h，观察待检菌株培养性状并进行镜检；重复上述培养操作，直至得到纯化菌株，经16s rDNA测序和同源性分析，获得植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌菌种。

5.根据权利要求4所述一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述益生菌复合物从猪肠道的分离后的训化步骤包括：将植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌分别接种于含大豆皂苷0.5～2.0％MRS培养液，37℃培养24h；反复接种培养10～25次后，接种MRS平板培养基；再将单个菌落接种于含大豆皂苷0.5～2.0％MRS培养液，37℃培养24h。

6.一种猪源益生菌复合物的应用，其特征在于：所述益生菌复合物应用于提高猪肠道屏障功能和免疫功能。

7.根据权利要求6所述一种猪源益生菌复合物的应用，其特征在于：所述猪为断奶仔猪。

8.根据权利要求4所述一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述步骤A中第一混悬液与生理盐水的体积比为1:9，内容物与生理盐水的质量比为1:9；所述步骤C中最终辐照后混悬液与生理盐水的体积比为1:9。