[发明专利]一种高浓度凝结芽孢杆菌液体发酵方法

说明书

本发明提供了一种高浓度凝结芽孢杆菌液体发酵方法，包括如下步骤：1)将凝结芽孢杆菌接入选择培养基中培养得到单菌落，进行种子培养，并做保藏；2)将保藏的凝结芽孢杆菌接入斜面培养基中，37℃恒温培养箱培养2～3天，取出至于4℃冰箱保存备用；3)从斜面培养基培养的凝结芽孢杆菌中挑一环菌泥接入种子培养基中进行扩大培养；4)将扩大培养后的种子液接入发酵培养基中进行分批补料发酵培养，即得高浓度凝结芽孢杆菌发酵液。该发明通过对培养基优化以及发酵过程优化，得到了高浓度发酵菌液，同时发酵液中无不溶性物质，降低了离心难度，便于浓缩，可提供高菌数粉样制剂，降低了生产成本，有助于产品推广，对畜禽健康养殖有重大意义。

技术领域

本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种高浓度凝结芽孢杆菌液体发酵方法。

背景技术

微生态制剂，是利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活的微生物制剂，具有天然无毒、促进宿主健康的作用。

凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans），革兰阳性，属于硬（或厚）壁菌门、芽孢杆菌纲、芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，是经美国FDA批准的一种“普遍认为安全”的杆菌类乳酸菌，其特点在于：1、凝结芽孢杆菌作为一种兼性厌氧菌，在肠道环境下能够代谢产生乳酸，形成酸性环境，抑制病原微生物生长，有益于宿主健康；2、能以芽孢形态存在，耐高温、耐胃酸、耐胆盐、环境抗逆性强；3、提高饲料品质，促进饲料的消化吸收，降低料重比；4、有效改善断奶仔猪由于应激、过敏反应引起的菌群失调性腹泄；5、无任何毒副作用，使用安全，改善养殖环境。凝结芽孢杆菌兼具乳酸菌类和芽孢杆菌类微生态制剂的优点，由于良好的饲喂效果和加工性能，已列入饲料添加剂名录。

然而，目前市场上凝结芽孢杆菌产品普遍存在菌体含量低、发酵液中固形物含量高后处理成本大，究其原因，还是凝结芽孢杆菌产业发酵水平低、加工过程菌体损失高，影响凝结芽孢杆菌的普及应用。

发明内容

本发明的目的是克服现有凝结芽孢杆菌产品存在菌体含量低、发酵液中固形物含量高后处理成本大的问题。

为此，本发明提供了一种高浓度凝结芽孢杆菌液体发酵方法，包括如下步骤：

1)将凝结芽孢杆菌接入选择培养基中培养得到单菌落，再挑取单菌落于种子培养基上进行种子培养，并做保藏；

2)将保藏的凝结芽孢杆菌接入斜面培养基中，37℃恒温培养箱培养2～3天，取出至于4℃冰箱保存备用；

3)从斜面培养基培养的凝结芽孢杆菌中挑一环菌泥接入种子培养基中进行扩大培养；

4)将扩大培养后的种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中进行分批补料发酵培养，即得高浓度凝结芽孢杆菌发酵液。

进一步的，所述步骤1)中选择培养基由按质量百分比计的如下组分：葡萄糖0.2～1%、蛋白胨1～2%、酵母粉0.5～1%、牛肉膏0.2～0.5%、无水氯化钙0.01～0.1%、氯化钠0.1～0.5%、一水合硫酸锰0.01～0.05%、L-半胱胺盐酸盐0.01～0.05%，余量为水，使用盐酸调pH至5.0～5.5，再加入琼脂粉1.5～2%，115℃灭菌30min制备得到。

进一步的，所述步骤1)中选择培养基培养条件为40～45℃恒温培养箱培养24h。

进一步的，所述步骤1)和步骤3)中种子培养基由按质量百分比计的如下组分：葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母浸粉1%，余量为水，在115℃条件下灭菌30min制备得到。

进一步的，所述步骤1)中种子培养及步骤3)中扩大培养的条件如下：40℃～45℃、150rpm～200rpm摇床培养8～12h。

所述步骤1)中菌种保藏方法如下：种子培养液加入10%～30%甘油，混匀移入离心管中，1.5mL/支，至于-80℃冰箱保藏。