[发明专利]基于双发夹结构的电致发光传感器及其构建方法、用途

权利要求书

1.基于双发夹结构的电致发光传感器构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将HP1、HP2、HP3和aptamer探针的DNA链加热至95℃保持5min，然后自然冷却至室温；

所述HP1选自以下序列：SH-TTT TTC AAC ATC AGT CTG ATA AGC TAC CAT GTG TAGATA GCT TAT CAG ACT TCA GCT GGA TAC CCT GGC CAC ACG AGT ATC CAG CTG A，HP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述HP2选自以下序列：SH-TTT TTT AAG CTA TCT ACA CAT GGT AGC TTA TCA GACTCC ATG TGT AGA，HP2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述HP3选自以下序列：TCA GCT GGA TAC TCG TGT GGC CAG GGT ATC CCA CGA GTATCC TTT TT-SH，HP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述aptamer探针的序列如下：TCG TGT GGC CAG GGT ATC CAG CTG AGC AGT TGA TCCTTT GGA TAC CCT GG，aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

S2，将四水合硝酸镉和四水合乙酸锰溶解于超纯水中，搅拌、加热至70℃后加入九水合硫化钠，将混合溶液置于70℃下回流3h获得反应物，使用乙醇和超纯水依次离心洗涤反应物，得到CdS:Mn QDs；

S3，将500μL CdS:Mn QDs与10μL摩尔浓度为2mmol/L的三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐溶液混合后，在混合液中缓慢加入HP2，得到CdS:Mn-HP2信号探针，其中三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐与HP2的物质的量之比为100：1；

S4，在搅拌过程中将0.6mL摩尔浓度为0.1mol/L的硼氢化钠加入20mL摩尔浓度0.25mmol/L的氯金酸溶液中，待溶液变为橘红色即获得纳米金；

S5，在500μL纳米金中依次加入50μL摩尔浓度为2μmol/L的HP3和5μL摩尔浓度为0.1mol/L的巯基己醇溶液，将混合溶液置于4℃下反应2h，得到纳米金-HP3信号探针；

S6，分别使用粒径为1.0μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝抛光粉依次打磨玻碳电极2min，每次打磨结束后使用二次蒸馏水冲洗玻碳电极，将经打磨的玻碳电极依次在硝酸溶液、无水乙醇和去离子水中超声波处理2min，得到干净的玻碳电极；

S7，将干燥的玻碳电极浸泡于2mL质量百分数为1％的氯金酸溶液中，在-0.2V的恒电位下电沉积30s获得纳米金颗粒修饰的玻碳电极-AuNPs/GCE；

S8，在AuNPs/GCE表面滴涂10μL摩尔浓度为1μmol/L的HP1孵育12h；

S9，在固载HP1的AuNPs/GCE表面修饰10μL摩尔浓度为1mmol/L的巯基己醇溶液；

S10，在巯基己醇溶液修饰的玻碳电极表面滴加10μL miRNA-21和10μL CdS:Mn-HP2的混合溶液孵育70min；

S11，在玻碳电极表面滴加10μL MUC1-aptamer复合物和10μL纳米金-HP3的混合溶液孵育90min得到工作电极；

S12，将工作电极、对电极铂丝、参比电极银/氯化银电极和电解质溶液组装成电致发光传感器，电解质溶液为摩尔浓度0.1mol/L、pH＝8.0的磷酸缓冲溶液，电解质溶液中含有摩尔浓度为0.05mol/L的过硫酸钾。

2.根据权利要求1所述的基于双发夹结构的电致发光传感器构建方法，其特征在于，所述步骤S2中九水合硫化钠与四水合硝酸镉的质量比为3.64：1，CdS:Mn QDs中Mn²⁺的掺杂浓度为0.0547mmol/L。