[发明专利]一种纯DNA双链缠结水凝胶及制备方法及应用

权利要求书

1.带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA前引物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)取2条摩尔数相同的DNA单链，通过退火进行双链碱基互补配对；

第一条DNA单链由30-105个核苷酸组成，第二条DNA单链由21-86个核苷酸组成；每条DNA单链由第一部分和第二部分组成：

第一条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的20-30个核苷酸，作为后续反应的前引物的粘性末端序列；

第二条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的11个核苷酸，序列为CCCCTAACCCC用SEQID NO.14所示，作为可形成i-motif结构的粘性末端序列；

第一条DNA单链的第二部分核苷酸序列与第二条DNA单链的第二部分核苷酸序列的核苷酸数相等且反向互补配对；

(2)将步骤(1)获得的产物与补骨脂素按摩尔比为1：10-100的比例，混合，在照射能量为1～6J的条件下紫外照射，获得带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA前引物。

2.权利要求1的方法制备的带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA前引物。

3.带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA后引物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)取2条摩尔数相同的DNA单链，通过退火进行双链碱基互补配对；

第一条DNA单链由30-105个核苷酸组成，第二条DNA单链由21-86个核苷酸组成；每条DNA单链由第一部分和第二部分组成：

第一条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的20-30个核苷酸，作为后续反应的后引物的粘性末端序列；

第二条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的11个核苷酸，序列为CCCCTAACCCC用SEQID NO.14所示，作为可形成i-motif结构的粘性末端序列；

第一条DNA单链的第二部分核苷酸序列与第二条DNA单链的第二部分核苷酸序列的核苷酸数相等且反向互补配对；

(2)将步骤(1)获得的产物与补骨脂素按摩尔比为1：10-100的比例，混合，在照射能量为1～6J的条件下紫外照射，获得带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA后引物。

4.权利要求3的方法制备的带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA后引物。

5.两端带有可形成i-motif结构的粘性末端的长双链DNA的制备方法，其特征是包括如下步骤：

向EP管中加入权利要求2所述带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA前引物和权利要求4所述带有可形成i-motif结构的粘性末端的双链线性DNA后引物，使两者终浓度相等且为0.1-2.0μM，目标DNA序列，使终浓度为0.1-3ng/μl，和1╳DNA聚合酶，最后使用去离子水补齐50μl体系，置于PCR仪中，进行PCR扩增，得到两端带有可形成i-motif结构的粘性末端的长双链DNA。

6.权利要求5的方法制备的两端带有可形成i-motif结构的粘性末端的长双链DNA。

7.纯DNA双链缠结水凝胶的制备方法，其特征是包括如下步骤：

将权利要求6所述的两端带有可形成i-motif结构的粘性末端的长双链DNA浓缩至1μg/μl，并将浓缩后的产物置于pH4.5-6.5的缓冲液中，形成纯DNA双链缠结水凝胶。

8.权利要求7的方法制备的纯DNA双链缠结水凝胶。

9.权利要求8的纯DNA双链缠结水凝胶作为表达基因在无细胞蛋白质生产的应用。