[发明专利]提取外泌体的共沉淀剂、试剂组、试剂盒和提取方法

权利要求书

1.一种提取外泌体的共沉淀剂，其特征在于，其含有如下组分：亲水聚合物、无机盐和葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的共沉淀剂，其特征在于，在所述共沉淀剂中，所述亲水聚合物的含量为25％-75％，优选为40％-60％(w/v)；更优选为50％(w/v)；

优选地，所述亲水聚合物选自聚乙二醇、葡聚糖和聚乙烯基吡咯烷酮中的任意一种或几种的组合；

优选地，所述亲水聚合物为聚乙二醇；

优选地，所述亲水聚合物为聚乙二醇和葡聚糖的组合；

优选地，聚乙二醇的分子量为7000-9000；更优选为8000。

3.根据权利要求2所述的共沉淀剂，其特征在于，所述无机盐选自钠盐、钾盐和镁盐中的至少一种；

优选地，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、葡萄糖酸钠和醋酸钠中的至少一种；

优选地，所述无机盐为氯化钠；

优选地，在所述共沉淀剂中，氯化钠的浓度为0.4-0.6mol/L；

优选地，在所述共沉淀剂中，葡萄糖的含量为2％-3％(w/v)；

优选地，所述共沉淀剂的溶剂选自PBS或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；

优选地，所述共沉淀剂的pH为6.8-7.4。

4.一种提取外泌体的试剂组，其特征在于，其含有权利要求1-3任一项所述的共沉淀剂和用于保存外泌体的保存液A；

优选地，所述保存液A含有如下组分：硫酸多粘菌素B、硫酸庆大霉素、Tris-HCl、EDTA和蔗糖；

优选地，在所述保存液A中，硫酸多粘菌素B的含量为0.02-0.04g/L；

优选地，在所述保存液A中，酸庆大霉素的含量为0.1-0.2g/L；

优选地，所述保存液A的溶剂选自PBS、Tris-HCl缓冲液或巴比妥钠-盐酸缓冲液；

优选地，所述保存液A的pH为7.0-7.2。

5.一种提取外泌体的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-3任一项所述的提取外泌体的共沉淀剂或权利要求4所述的提取外泌体的试剂组。

6.一种外泌体及其核酸和蛋白共提取的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求4所述的提取外泌体的试剂组，以及核酸提取试剂组和蛋白提取试剂组。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂组包括如下试剂中的至少一种：裂解液、抽提液A、洗脱液A、洗脱液B和保存液B；

优选地，所述裂解液含有：盐酸胍、EDTA-2Na和Tris-HCl；

优选地，所述裂解液含有：3-5mol/L盐酸胍、10-15mmol/L EDTA-2Na和40-45mmol/LTris-HCl；优选地，所述抽提液A含有：SDS和Triton-100；

优选地，所述抽提液A含有：0.01-0.02g/mL SDS和4-6μL/mL Triton-100；

优选地，所述洗脱液A含有乙醇、GuSCN和柠檬酸钠；

优选地，所述洗脱液A含有20％-40％乙醇、1-3M GuSCN和5-7mM柠檬酸钠；

优选地，所述洗脱液B含有乙醇、NaCl和Tris-HCl；

优选地，所述洗脱液B含有75％-85％乙醇、18-22mM NaCl和1-3mM Tris-HCl；

优选地，所述保存液B为含0.1％-0.2％DEPC的水溶液；

优选地，所述核酸提取试剂组还包括用于吸附核酸的吸附柱；

优选地，所述吸附柱的基质为玻璃纤维滤膜；

优选地，所述吸附柱为硅胶柱；

优选地，所述核酸提取试剂组所提取的核酸为RNA。