[发明专利]一种检测自然水体中粪固醇浓度的样品前处理方法

说明书

本发明公开了一种检测自然水体中粪固醇浓度的样品前处理方法，取super100型检测材料作为固定相，装入SPE柱中，得到SPE分离色谱柱；使用甲醇水溶液对SPE分离色谱柱进行活化，平衡；取待测水体样品按照固定流速上样；使用低浓度甲醇水溶液对上样后的SPE色谱分离柱进行清洗；使用高浓度甲醇水溶液对SPE色谱分离柱进行样品洗脱，洗脱液吹干后使用HPLC流动相定容，然后使用高效液相色谱仪进行分析计算得到水体中的粪固醇的浓度。本发明利用色谱分离原理结合高效液相色谱检测原理，先对待测水体中的COP进行富集然后使用高效液相色谱进行检测，适合快速准确检测自然水体中低浓度的粪固醇，最低检测限可达100ng/L。

技术领域

本发明属于水体污染物检测技术领域，具体是一种检测自然水体中粪固醇浓度的样品前处理方法。

背景技术

随着人们社会工业化水平的提高，人们的生活水平也日益提高。但是随之而来也带来了很多问题。水污染问题严重影响着人们的生活和健康。生活废水污染是水污染的重要组成部分。虽然，当前我国大部分城市都建立了生活废水处理站，但是仍然有很多生活废水排入到自然水体中对自然水体造成污染。且生活污水成分复杂，很难对污染源进行追本溯源。因此我们需要对自然水体进行长期的监测，以及对污染源进行溯源。

在过去的几十年里，研究者尝试利用粪甾醇类物质作为指示剂。指示水体粪便污染同时辨别粪便污染源的所在。很多粪甾醇物质包括胆固醇(CHOE)、胆甾烷酮(CHOA)、α-胆甾烷酮等等都可以用作受纳水体的污水指示剂。但是COP在人类和其他动物的粪便中的组成成分不同，COP在其他动物粪便中的成分含量比人类的低的多。因此，研究者利用这一点来辨别粪便污染物的来源。

粪固醇(COP)是消化道中未被吸收的胆固醇在结肠中被细菌利用所形成的还原产物，随着粪便排出。在生活污水中，COP是粪甾醇类物质的主要成分。有研究表明，COP在20℃，有氧条件下半衰期为10天左右。然而在无氧条件，COP在450天之内都没有任何生物降解的迹象。

目前研究表明，COP目前在污水中的检测限为几十μg。常规的检测试纸的检测限更高且存在假阳的情况，而检测限较高的生物检测法所需要的检测时间过长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种自然水体中粪固醇检测样品前处理方法，为后续高效液相色谱快速准确检测水体中低浓度粪固醇提供支持。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种检测自然水体中粪固醇浓度的样品前处理方法，包括如下步骤：

(1)取super100型检测材料作为固定相，装入SPE柱中，得到SPE分离色谱柱；

(2)使用甲醇水溶液对SPE分离色谱柱进行活化，平衡；

(3)取待测水体样品按照固定流速上样；

(4)使用低浓度甲醇水溶液对上样后的SPE色谱分离柱进行清洗；

(5)使用高浓度甲醇水溶液对步骤(4)处理后的SPE色谱分离柱进行样品洗脱。

还包括步骤(6)：收集上述前处理步骤得到的洗脱液，吹干后使用高效液相色谱流动相定容，随后进行高效液相色谱进行分析。

其中，所述super100型检测材料购自南京亘闪生物科技有限公司，其为骨架结构为苯乙烯-二乙烯苯共聚物的固体颗粒材料，粒径为50-100μm，比表面积400-800m²/g。通过对COP化学和物理性质的研究，发现COP极性很小(log Kow＝8.82)，是典型的疏水性物质，其很容易被非极性固定相吸附。因此利用super100型检测材料(南京亘闪生物科技有限公司产品)对待测水体进行前处理，富集COP含量，然后结合高效液相色谱可以快速的测定水体中的COP含量。通过前处理后可以间接提高自然水体中COP的检测限。