[发明专利]一种适于多种禾本科植物高效组织培养的方法

权利要求书

1.一种适于多种禾本科植物组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选择及消毒：选择五节芒的幼穗或芦竹的幼嫩花药作为外植体进行消毒处理；

（2）愈伤组织诱导分化：外植体消毒后接种在含有MS培养基的大量元素+5倍B₅培养基的微量元素+J₃ 培养基中41.8 mg/L的 FeSO₄·7H₂O和55.9mg/L 的Na₂ EDTA+B₅培养基的有机成分+3.0-4.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.3-0.5g/L水解酪蛋白+0.3-0.5g/L水解乳蛋白+1.0g/L脯氨酸+0.3-0.5g/L谷氨酰胺+20～30g/L蔗糖+3-10g/L琼脂粉培养基上培养，获得丛生芽；

（3）增殖壮苗生根：将步骤（2）获得的丛生芽接种到MS+1.0mg/L 6-BA+0.4-0.6mg/L KT+1.0-2.0mg/L矮壮素+ 20～30.0g/L蔗糖+ 3-10 g/L琼脂粉培养基上进行增殖、壮苗和生根；

（4）炼苗移栽。

2.根据权利要求1所述的适于多种禾本科植物组织培养的方法，其特征在于，

将步骤（2）获得的愈伤组织经过单独的分化过程后再进行增殖壮苗生根，单独的分化过程为：将步骤（2）获得的愈伤组织接在含有N₆培养基的大量元素+N₆培养基的铁盐+B₅培养基的维生素+ CuSO₄ 3.0 mg/L +0.5g/L谷胺酰氨+0.5g/L脯氨酸+0.3g/L水解乳蛋+2.0-2.5mg/L 6-BA+0.5-1.0mg/L NAA+蔗糖20.0-30.0 g/L+山梨醇20.0 g/L +琼脂粉3-10g/L培养基上培养，获得丛生芽。

3.根据权利要求1或2所述的适于多种禾本科植物组织培养的方法，其特征在于，

步骤（1）选取不同外植体进行消毒处理的具体过程：

幼穗：在孕穗早期，选取禾本科植物材料的幼穗, 保留苞叶，直接在超净工作台上用0.1%升汞消毒7～15分钟，无菌水清洗5～6次，然后取出放置在无菌滤纸上，吸干外植体表面水分, 剥开苞叶取出幼穗，然后用无菌手术刀片将幼穗切成0.8-1.2cm长的穗段，一簇一簇穗段直接接种，或者将其分离，单个接种在步骤（2）愈伤组织诱导分化培养基上；

幼嫩花药：在孕穗中期，选取禾本科植物生长健壮的幼穗，经检测，取花粉细胞处于单核早期的幼嫩花药，剥去叶鞘和外层苞叶，保留两层苞叶，然后在超净工作台上用0.1%升汞消毒7～15分钟，无菌水清洗5～6次，然后取出放置在无菌滤纸上，吸干外植体表面水分,然后将花药挤出，立即置于步骤（2）愈伤组织诱导分化培养基上来防止幼胚褐化。

4.根据权利要求1或2所述的适于多种禾本科植物组织培养的方法，其特征在于，

步骤（2）将步骤（1）消毒处理好的外植体接种在步骤（2）使用的培养基上，每个培养瓶外植体个数为10～50个，愈伤组织诱导分化出丛生芽时，直接转入到步骤（3）使用的培养基中进行增殖壮苗生根培养获得大量根叶俱全有效苗；

或者将步骤（2）获得的愈伤组织经过单独的分化过程后再进行增殖壮苗生根，具体是将单独的分化过程获得的丛生芽切下来，分成1～5株一丛，每瓶1～7丛，转入步骤（3）培养基中，将获得的5～10cm高根叶俱全有效苗进行移栽。

5.根据权利要求1所述的适于多种禾本科植物组织培养的方法，其特征在于，

步骤（4）将具有 3～5片叶子的生根苗，打开瓶盖炼苗2～4d，从培养瓶中取出，分成单株，用流水清洗黏附在根部的培养基后用于移栽。