[发明专利]一种胰岛囊泡富集装置及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种胰岛囊泡富集装置及其制备方法和应用，适用于与原代胰岛细胞以及胰岛细胞系中囊泡的富集与研究。所述装置由两层亚克力结构、两层密封软垫及两片不同孔径的滤膜组成，该装置由机械方式固定组装。本装置采用物理方法从以尺寸为标准去除杂质、富集胰岛囊泡，确保胰岛囊泡的纯度。本装置制作简便，操作简单，可以有效富集胰岛囊泡用于后续研究。

技术领域

本发明涉及胰岛囊泡富集装置的制备方法，属微机械加工技术领域。

背景技术

胰岛素是血糖稳态的关键调节因子之一，而胰岛素分泌异常被认为是糖尿病发展的重要因素。超过99％的胰岛素是由胰腺β细胞分泌的。在每个β细胞内，胰岛素存储在称为胰岛素分泌颗粒(ISG)的特定细胞器中，并通过调节的分泌途径释放。当血糖水平升高时，ISG与质膜融合并释放胰岛素。胰岛素分泌是一个复杂而有组织的动态过程，包括未成熟ISG(iISG)从高尔基体网络出芽，成熟ISG(mISG)与细胞膜融合等过程。然而，由于对ISG相关过程(包括生物发生，成熟，转运和胞吐作用)中涉及的蛋白质缺乏足够的了解，参与这一过程的分子机制在很大程度上是未知的。因此，在确定iISGs和mISGs的特性和蛋白质含量之前，对它们进行分离和富集是非常重要的。

细胞器蛋白质组图谱通常通过亚细胞分级分离方法获得，例如密度梯度离心等，然而经过离心处理得到的囊泡仍然含有很多杂质，对后续研究产生不利影响，迫切需要一种方法来得到纯度更高的胰岛囊泡。

本发明设计并制作了一种胰岛囊泡富集装置，该装置为多层结构，包括两个通道层、两个密封层和过滤层。利用该装置，可以从初步离心处理之后得到的混合物中有效富集胰岛囊泡，以用于后续研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胰岛囊泡富集装置。

一种胰岛囊泡富集装置，该装置有多层结构，由上而下依次为上层通道、密封软垫a、多孔滤膜层、密封软垫b、下层通道；所述多孔滤膜层包括两片多孔膜；上述各层结构之间通过机械方式固定；

其中，上层通道上设有细胞裂解液入口、细胞裂解液出口、囊泡收集入口、囊泡收集出口；下层通道上设有囊泡收集对应入口、富集通道、囊泡收集对应出口；所述上层通道的细胞裂解液入口和细胞裂解液出口通过多孔滤膜与下层通道的细胞裂解液对应结构相通。

所述上层通道和下层通道材料为亚克力或其他硬材质。

上下层通道采用硅胶或其他材质软垫密封。

针对囊泡的大小采用不同孔径的多孔膜对囊泡富集。

所述多孔滤膜材质为聚碳酸酯或其他材质。

所述多孔滤膜孔径其中一片为150-250um，另外一片为350-450um。

该装置通过螺丝钉或夹具固定。

本发明提供的胰岛囊泡富集装置用于胰岛囊泡的富集与纯化。

本发明公开了一种胰岛囊泡富集装置的制备方法，具体如下：

(1)装置通道层的制备：首先进行图形的设计与绘制，然后利用激光加工技术进行通道层的加工，得到上层通道和下层通道；

(2)密封软垫的制备：对两层密封软垫进行镂空设计；

(3)准备多孔滤膜，滤膜直径大于上层空腔3mm以上；

(4)将通道层、密封软垫、滤膜进行组装，边缘用螺丝钉固定得到胰岛囊泡富集装置。

本发明具体采用以下技术方案：

装置通道层的制备。