[发明专利]一种高通量多位点SNP检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201911251503.5 | 申请日： | 2019-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN111187809B | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 焦章平;周骋;潘雅姣;王颖希;曲保旺;赵怡;薛卢艳 | 申请（专利权）人： | 北京爱普益生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 多位点 snp 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种高通量多位点SNP检测试剂盒，其特征在于，
所述检测试剂盒包括由188个SNP位点特异性引物对组成的引物组合物，所述引物组合物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:362所示；
每条所述特异性引物的5’端连接有样本标签序列，上游所述特异性引物的样本标签序列的5’端连接有测序接头，下游所述特异性引物的样本标签序列的5’端连接有固定接头；
所述样本标签序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:363-SEQ ID NO:378；
所述测序接头的核苷酸序列如SEQ ID NO:379所示。
2.如权利要求1所述的高通量多位点SNP检测试剂盒，其特征在于，
所述固定接头的核苷酸序列如SEQ ID NO:380所示。
3.如权利要求1所述的高通量多位点SNP检测试剂盒，其特征在于，
所述引物对中，核苷酸序列如SEQ ID NO:127所述的引物对，可同时对rs11547464、rs1805007、rs201326893、rs1110400、rs1805008和rs885479六个位点进行检测。
4.如权利要求1所述的高通量多位点SNP检测试剂盒，其特征在于，
所述引物对中，核苷酸序列如SEQ ID NO:128所述的引物对，可同时对rs1805005、rs180500和rs22284793三个位点进行检测。
5.一种利用权利要求1-4任一项所述的高通量多位点SNP检测试剂盒的检测方法，其特征在于，
提取样本DNA并加入到含所述引物组合物的PCR反应体系中，进行多重PCR反应，构建测序DNA文库；
将所述文库DNA经过乳液DNA聚合酶链式反应，通过携带单一DNA片段的颗粒经乳液覆盖形成独立的PCR微反应池，实现整个片段文库的独立平行扩增，获得测序模板；
对所述文库的测序模板进行高通量DNA测序，对测序数据结果分析。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
所述聚合酶链式反应为多重PCR反应，其体系中各原料的体积份数为：含有Mg2+，dNTPs，Taq酶的Tris-HCl缓冲液、如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:181所示引物组合物、样本DNA和无核酸酶水。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，
所述多重PCR反应程序为：93-96℃1min；93-96℃30s，50-63℃30s，68-72℃1min，共10-25个循环；随后，在10℃下保存。
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