[发明专利]一种针叶樱桃的破壁方法

权利要求书

1.一种针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、细胞离析：将针叶樱桃用破碎成2～3mm的碎块，在pH值为5.5～7的磷酸盐缓冲液中浸泡24h，然后加入果胶酶，30～40℃、30～80rpm搅拌酶解3～6h，所得酶解物离心取沉淀，真空冷冻干燥，得到针叶樱桃单细胞；其中，所述针叶樱桃与所述磷酸盐缓冲液的质量比为1:(5～20)；所述果胶酶的添加量为所述针叶樱桃质量的0.1％～0.5％，所述果胶酶的酶活为5万U/g；

S2、细胞溶胀：将步骤S1所述针叶樱桃单细胞加入pH值为7.4～8.0的磷酸盐缓冲液混匀，静置，得到含有溶胀的针叶樱桃单细胞的溶液；其中，所述磷酸盐缓冲液的添加量为所述干燥针叶樱桃单细胞质量的25％以上；

S3、压力破壁：将步骤S2所述含有溶胀的针叶樱桃单细胞的溶液中加入无水乙醇至液体含量为步骤S2所述干燥针叶樱桃单细胞质量的45％～55％，在二氧化碳氛围下加压，压力为12～28MPa，加压保持时间为10～30min，然后释放压力，释压时间0.1s，得含有破壁针叶樱桃细胞的溶液。

2.根据权利要求1所述针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，步骤S1所述取沉淀具体为：将所述酶解物在4000～5000rpm离心10～30min，取沉淀。

3.根据权利要求1所述针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，步骤S1所述真空冷冻干燥的条件为：-50℃、真空度10Pa。

4.根据权利要求1所述针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，步骤S2所述静置时间为10～30min。

5.根据权利要求1所述针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，步骤S2所述磷酸盐缓冲液的添加量为所述干燥针叶樱桃单细胞质量的25％～40％。

6.根据权利要求1所述针叶樱桃的破壁方法，其特征在于，包括步骤：

S1、细胞离析：将针叶樱桃用打浆机破碎成2mm～3mm的碎块，加入其20倍质量的pH值为7的磷酸盐缓冲液，浸泡24h，然后加入所述针叶樱桃质量0.5％、酶活为5万U/g的果胶酶，80rpm、40℃搅拌酶解6h，所得酶解物在5000rpm下离心30min，取沉淀；将所述沉淀置于-50℃、真空度10Pa的条件下，真空冷冻干燥，得到干燥针叶樱桃单细胞；

S2、细胞溶胀：取步骤S1所述干燥针叶樱桃单细胞100g，加入40g、pH值为8.0的磷酸盐缓冲液，混合均匀后静置30min，得含有溶胀的针叶樱桃单细胞的溶液；

S3、压力破壁：将步骤S2所述含有溶胀的针叶樱桃单细胞的溶液中加入15g无水乙醇，使得液体含量为步骤S2所述干燥针叶樱桃单细胞质量的55％，在二氧化碳氛围下加压，压力为28MPa，加压保持时间为30min，然后在0.1s内瞬间释放压力，得含有破壁针叶樱桃细胞的溶液。