[发明专利]一种山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的检测方法

说明书

本发明涉及一种山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的检测方法，特别涉及一种应用HPLC法同时测定山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。该方法采用十八烷基键合相高效液相色谱柱，紫外检测器，以0.2％磷酸‑甲醇为流动相。本方法简便、快速、准确、可靠，色谱分离度良好，可使齐墩果酸和熊果酸呈现良好的分离度，适用于山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的测定。

技术领域

本发明涉及一种山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的检测方法，特别涉及一种应用HPLC法同时测定山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸的含量的方法。

背景技术

山香圆叶，为省沽油科植物山香圆Turpina arguta Seem.的干燥叶，性寒，味苦，归肺、肝经，有清热解毒，利咽消肿，活血止痛的功效，主要用于乳蛾喉痹，咽喉肿痛，疮疡肿毒，跌扑伤痛等症。现代研究发现山香圆属植物的化学成分主要包括黄酮类、三萜类、大柱烷类和酚酸类等，具有抗炎、抗菌、抗氧化、镇痛、免疫调节等药理活性，其中主要活性成分为黄酮类成分和三萜类成分。含量测定是药品质量控制标准的关键内容。在现行山香圆叶药材中国药典质量标准中，对三萜类成分尚未有相关的要求。目前关于山香圆含量测定主要以黄酮类成分，如女贞苷、野膝树苷和鞣花酸三种含量较高的成分为主，对于三萜类成分含量测定报道较少。有学者研究发现，熊果酸、齐墩果酸、对香豆酸、肉豆蔻酸等三萜类成分，具有抗菌、抗溃疡和抗氧化的功能。现有文献记载，有学者使用薄层扫描法和液相色谱法测定山香圆叶中熊果酸的含量，齐墩果酸和熊果酸为同分异构体，往往同时存在于植物中。本发明人重复了文献中报道的薄层扫描法和高效液相色谱法，均无法很好地将两者完全分离。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种HPLC法同时测定山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的测定方法，该方法简便、快速、准确、可靠，色谱分离度良好，可使齐墩果酸和熊果酸呈现良好的分离度，适用于检测山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸。

本发明提供的一种HPLC法测定山香圆叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液制备：取山香圆叶粉末适量，加入溶剂溶解，超声处理过滤后，取续滤液；

(2)对照品溶液或对照品贮备液制备：称取适量齐墩果酸对照品、熊果酸对照品，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；

(3)高效液相色谱法条件：以C18为色谱柱，以0.2％磷酸-甲醇为流动相，柱温为15～25℃，进样量为10μL～30μL；

(4)测定：量取供试品溶液、对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定；

(5)计算。

优选地，所述的高效液相色谱仪还附带紫外检测器。

优选地，所述的色谱柱为ACE ExcelC18-AR，优选规格为：4.6×150mm，3μm。

优选地，所述的流动相中0.2％磷酸-甲醇的体积比为8～18:82～92，更优选为，11～15:85～89。

优选地，步骤(1)、(2)溶剂为乙醇。

优选地，步骤(2)所述的齐墩果酸对照品、熊果酸对照品浓度(mg/ml)比为0.2～5:5～0.2，优选为1:1。

优选地，所述流动相的流速为0.4～0.8mL/min，更优选为0.6mL/min。

优选地，所述进样量为10～20μL，更优选为20μL。

优选地，所述柱温为20℃。

优选地，所述高效液相色谱仪的运行时间为30min～50min。

优选地，所述计算公式：

含量％＝(Cs×V×Ai)/(1000×m×As)×100％