[发明专利]检测TAT（凝血酶-抗凝血酶复合物）的电化学发光试剂盒、制法

说明书

本发明涉及一种从血液中检测新型血栓标志物TAT（凝血酶‑抗凝血酶复合物）的电化学发光试剂盒、制法。制备的试剂盒包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的凝血酶抗体工作液，三联吡啶钌标记的抗抗凝血酶抗体工作液，TAT的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，清洗液。试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素‑生物素信号放大系统，检测灵敏度高、线性范围宽，检测结果重复性好，可以实现凝血酶‑抗凝血酶复合物的准确定量。

技术领域

本发明涉及一种检测TAT（凝血酶-抗凝血酶复合物）的电化学发光试剂盒及用法，属于免疫分析技术领域。

背景技术

凝血酶(thrombin)是一种多功能丝氨酸蛋白水解酶，具有与胰凝乳蛋白酶相似的序列与结构。它含A、B两条多肽链，由一个链间二硫键相连。β链为功能链，具有典型的丝氨酸蛋白水解酶折叠结构，含有1个位于两个β折叠桶之间的活性中心，2个外结合位点，1个Na离子结合位点，一个自我催化水解环以及一个W60d环。凝血酶具有Na离子诱导的变构酶特性，在血液中有Na离子结合型和Na离子解离型两种构象。这两种构象是可以相互转化的，其相互转化的部分机理是由于效应因子或底物结合到凝血酶的特定位点而引起构象发生变化和能量转移，从而改变了Na离子结合与解离的平衡状态¹。

凝血酶直接作用于血液凝固过程的最后一步，促使血浆中的可溶性纤维蛋白原转变成不溶的纤维蛋白，从而达到速效止血的目的。而且还能促进上皮细胞的有丝分裂，加速创伤愈合，是一种速效的局部止血药。凝血酶适用于结扎止血困难的小血管、毛细血管、实质性脏器的出血及其他各种出血。还具有激活受体，产生细胞生物学效应，如诱发炎症、诱导细胞释放细胞因子、引起细胞增殖、组织器官再生等。中枢神经系统的凝血酶还具有神经毒性，会引起脑细胞损伤。

凝血酶半衰期较短，很难检测到，因此我们可以检测凝血酶与抗凝血酶所形成的复合物。升高说明与DIC，DVT，PE以及心房颤动等其他凝血系统激活状态有关²。

目前已有的检测凝血酶-抗凝血酶复合物的方法很少，主要是Elisa方法和极少的管式化学发光方法。Elisa方法有显著的缺陷，灵敏度低，重现性差，操作不便等。而管式化学发光方法也存在酶标抗体稳定性较差，结果重现性低等多个问题。作为免疫分析技术中优势明显的电化学发光免疫分析技术，在测定结果的准确性和操作便利性等方面都具有显著优势。目前尚未有电化学发光技术用于TAT检测的成熟方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为提升现有技术中对TAT检测的效果和水平，提供一种检测TAT（凝血酶-抗凝血酶复合物）的电化学发光试剂盒及制法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种检测TAT（凝血酶-抗凝血酶复合物）的电化学发光试剂盒，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的凝血酶抗体工作液，三联吡啶钌标记的抗抗凝血酶抗体工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，清洗液。

优选地，所述凝血酶抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段，优选来源于鼠、兔、羊。

优选地，所述链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液由pH为6.8～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05～2wt％的牛血清白蛋白和/或酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚(Brij35)和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚(Triton X-100)和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween 20)和/或月桂醇聚氧乙烯醚(平平加O-20)、0.05～0.5wt％的proclin 300和/或叠氮钠。