[发明专利]分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株和抗可替宁单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株和抗可替宁单克隆抗体及其应用。该杂交瘤细胞株分类命名为COT鼠单抗9E‑8D细胞株，已于2019年11月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2019274。本发明的杂交瘤细胞株COT‑9E‑8D分泌的单克隆抗体能够与可替宁特异性结合，抗体效价高，对可替宁具有良好的结合特异性和检测灵敏度。该抗可替宁单克隆抗体对可替宁的50％抑制浓度IC₅₀可达40ng/ml，优于现有的抗可替宁单克隆抗体。

技术领域

本发明属于可替宁检测技术领域，具体涉及一种分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株和抗可替宁单克隆抗体及其应用。

背景技术

人类暴露于环境烟草烟雾(environmental tobacco smoke，EST)中会对人类健康造成潜在的威胁作用，这种潜在威胁以及EST中人体的暴露水平受到越来越多的关注。烟草中含有几千种化学物质，其中约有60种已被证实或被怀疑对人体具有致癌作用。这些致癌物不仅影响吸烟者的身体健康，而且对被动吸烟者的身体健康也存在巨大的威胁。监测人群体内的烟草含量能直接了解EST中人体的暴露水平。

在烟草含有的诸多化学物质中，尼古丁是主要的成瘾物质。进入人体的尼古丁经口腔、喉部、气管及肺泡吸收进入血液循环，其中，约80％的尼古丁在肝脏中被细胞色素氧化酶P450-2A6(CYP450-2A6)首选代谢为可替宁，而后在肝脏中进一步被代谢，代谢产物随后通过尿液等途径排出。可替宁占所有代谢产物的70-80％，目前，可替宁已成为目前公认的评估受检者烟气暴露程度、吸烟量以及吸烟对人体健康影响程度最有效的生物标志物。

目前已见文献报道的有关可替宁的检测方法，有气相色谱法、液相色谱法、高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱联用法。不过这些仪器分析方法的前处理步骤十分复杂、耗时长，通量低且成本高。

免疫分析法是基于抗原和抗体特异性相互作用的原理而建立的一类分析方法，其中的酶联免疫吸附法(ELISA)具有安全、通量高、灵敏度高、成本低等优势易于大量样本的检测。但要研究建立任何一种免疫学检测技术，都必须先获得能够与受检物质(如可替宁)特异结合的抗体，而目前针对可替宁制备的抗体均存在抗体效价低、检测灵敏度低等问题。

发明内容

本申请的发明目的是提供一种分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株和抗可替宁单克隆抗体及其应用。

为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：

本发明一种分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株，分类命名为COT鼠单抗9E-8D细胞株(以下简称杂交瘤细胞株COT-9E-8D)，已于2019年11月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2019274。

基于此，本发明还提供了一种抗可替宁单克隆抗体，该抗可替宁单克隆抗体即由上述的分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌获得。

本发明的杂交瘤细胞株COT-9E-8D分泌的单克隆抗体能够与可替宁特异性结合，抗体效价达1×10⁶，对可替宁具有良好的结合特异性和检测灵敏度，该抗可替宁单克隆抗体对可替宁的50％抑制浓度IC₅₀可达40ng/ml，定性检测时的检测限至少可达100ng/ml，优于现有的抗可替宁单克隆抗体。

基于此，本发明还提供了上述的分泌抗可替宁单克隆抗体杂交瘤细胞株或抗可替宁单克隆抗体在检测可替宁中的应用。