[发明专利]一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗包括抗原浓缩液和纳米铝佐剂；

所述抗原浓缩液包括灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液。

2.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液体积比为1:1:1:1:1。

3.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液含量均为5×10⁷CFU/mL。

4.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述纳米铝佐剂体积比为10％。

5.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗还包括1％(w/v)的硫柳汞和兽医学可接受的疫苗稀释剂。

6.根据权利要求5，其特征在于所述疫苗稀释剂为0.9％NaCl溶液或PBS溶液。

7.应用权利要求1所述三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述三联灭活疫苗制备方法包括以下步骤：

S1、分别将副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的菌株增殖得分别得到培养液；

S2、分别取步骤S1中的培养液，加入培养液总体积0.1％-0.15％的灭活剂，经4℃灭活72小时，期间搅拌数次，再在37℃水浴2小时，得到灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的培养液；

S3、将步骤S2中灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的培养液进行浓缩，再分别加入0.9％NaCl溶液或PBS溶液重悬菌体，得到副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液；

S4、取步骤S3中副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的抗原浓缩液加入乳化机，同时按配方比例加入纳米铝佐剂、稀释剂、硫柳汞进行低速搅拌，混合得到副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌灭活疫苗。

8.根据权利要求7所述三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中灭活剂为β-丙内酯。

9.根据权利要求7所述三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的细菌经浓缩后细菌含量为相当于灭活前活菌数为5×10⁹FU/mL。

10.根据权利要求7所述三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，在步骤S4后分别对副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌培养进行无菌检验、安全检验和效力检验。