[发明专利]光遗传与脑啡肽酶基因的结合方法

权利要求书

1.光遗传与脑啡肽酶基因的结合方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)脑啡肽酶基因和光控用离子通道蛋白基因ChR2的构建：以哺乳动物表达质粒VR1012为基因载体，分别将脑啡肽酶基因及光激活神经元通道蛋白ChR2基因通过PCR、酶切、连接和挑取单克隆的方法重组到真核表达质粒上，并在ChR2前加上hSyn的神经特异性启动子，得到可在体内外同时表达脑啡肽酶及光激活神经元通道蛋白ChR2的重组质粒；

2)脑啡肽酶后连接EGFP绿色标签，在ChR2后连接mCherry红色标签；

3)将得到的重组质粒DNA进行基因测序，在核酸分子水平上验证脑啡肽酶和ChR2的基因是否正确的插入到VR1012的真核表达质粒中。

2.根据权利要求1所述的光遗传与脑啡肽酶基因的结合方法，其特征在于，脑啡肽酶基因和光控用离子通道蛋白基因ChR2功能的验证：

首先将构建好的脑啡肽酶基因及光激活神经元通道蛋白ChR2基因重组质粒转染293T细胞48h后，通过荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫荧光来验证其是否能够成功表达，并通过流式细胞术对表达效果进行定量分析；

当转染海马神经元48h后，给予不同频率的光照射，通过膜片钳技术检测细胞膜电位变化及去极化效果，并通过细胞染色和流式细胞术实验来验证该光控神经元活化系统是否构建成功。