[发明专利]一种黄体酮半抗原、人工抗原和多克隆抗体及其制备方法和应用有效

专利信息
申请号: 201911259822.0 申请日: 2019-12-10
公开(公告)号: CN110894208B 公开(公告)日: 2021-02-19
发明(设计)人: 赵肃清;卢明磊;梁敏婷;张乐恒;潘俊康;陈彩燕;丁金龙;崔锡平;卫梦尧;钟颖颖;李霞;张春国 申请(专利权)人: 广东工业大学
主分类号: C07J7/00 分类号: C07J7/00;C07K14/765;C07K16/44;G01N33/74
代理公司: 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 代理人: 赵崇杨
地址: 510060 广东*** 国省代码: 广东;44
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 黄体酮 半抗原 人工 抗原 克隆 抗体 及其 制备 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种黄体酮BA-ELISA检测试剂盒,其特征在于,包括黄体酮标准品、黄体酮完全免疫原为包被抗原、生物素化的黄体酮特异性多克隆抗体、包被溶液、洗涤液、封闭液、HRP标记的链霉亲和素、底物显色液和终止液;所述黄体酮完全免疫原是由黄体酮半抗原经活泼酯法与牛血清蛋白偶联得到;所述黄体酮特异性多克隆抗体由所述黄体酮完全免疫原乳化后免疫兔后得到;所述黄体酮半抗原其结构式如式(I)所示:

所述的黄体酮半抗原的制备方法,包括如下步骤:

S1.将羧甲氧基胺半盐酸盐和无水吡啶按摩尔比3:1在甲醇溶液中分别溶解;

S2.向S1的无水吡啶溶液中加入甲醇溶解的黄体酮P4溶液,黄体酮P4与无水吡啶的摩尔比为2:1;

S3.将上述溶液混匀,得黄色黏稠状液体;再用二氯甲烷溶解黄色黏稠状液体,去离子水洗涤,无水硫酸镁除水,抽滤,得到淡黄色液体,再旋转蒸发除去溶剂、浓缩;

S4.以二氯甲烷/甲醇20:1→16:1→12:1为洗脱剂,采用硅胶层析柱纯化残渣,重复1~2次,得到白色的目标化合物,即黄体酮半抗原。

2.一种利用权利要求1所述试剂盒检测黄体酮的方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1.包被:用包被缓冲液将包被抗原稀释至1μg/mL,包被于酶标板,100μL/孔,4℃包被12~16小时,用PBST洗板3~5次并用吸干水分;

S2.封闭:用含30%脱脂奶粉的0.01mol/L PBST以270μL/孔进行封闭,37℃孵育1~2h,再如步骤S1洗涤操作;

S3.加生物素化抗体和黄体酮标准品:将生物素化多克隆抗体用0.01mol/L PBST稀释8,000倍,以50μL/孔加入到酶标板中,同时分别以50μL/孔加入含10%DMF的PBS溶液溶解的黄体酮标准品和待测样品液,10%DMF的PBS溶液作为空白对照,37℃孵育1~2h,再如步骤S1洗涤操作;

S4.加HRP标记的链霉亲和素:每孔加入1:10,000稀释过的HRP标记的链霉亲和素100μL,37℃孵育1~2h,再如步骤S1洗涤操作,吸干酶标板的水分;

S5.显色和终止反应:加入新鲜配制的TMB显色液,100μL/孔,37℃孵育10~20min,然后加入2M硫酸终止液,50μL/孔;

S6.检测吸光值:立即检测酶标板各孔在450nm处的吸光值,利用软件得出竞争抑制曲线,将待测样品液的吸光值代入竞争抑制曲线,获得待测样品液中黄体酮的含量。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广东工业大学,未经广东工业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201911259822.0/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top