[发明专利]一种利用斑马鱼为模型评价栀子水提取物活性的方法

权利要求书

1.一种利用斑马鱼为模型评价栀子水提取物活性的方法，其特征在于，以斑马鱼为模型评价栀子水提取物的抗炎活性，包括以下步骤：

S1、将栀子水提取物与斑马鱼胚胎混合，对斑马鱼胚胎进行孵育；

S2、采用硫酸铜溶液对步骤S1中经孵育后得到的斑马鱼进行处理，造成急性炎症；

S3、采用多聚甲醛溶液对步骤S2中经硫酸铜溶液处理后得到的斑马鱼进行固定处理；

S4、采用荧光显微镜观察步骤S3中经多聚甲醛溶液固定处理后的斑马鱼的巨噬细胞炎症反应，计数神经丘周围巨噬细胞迁移个数；

S5、以步骤S4中得到神经丘周围巨噬细胞迁移个数为评价指标，用于评价栀子水提取物的抗炎活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述神经丘周围巨噬细胞迁移个数＜12.75±6.714个，且差异系数P＜0.05时，提示栀子水提取物对斑马鱼具有抗炎作用。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述孵育在光照条件下进行；所述孵育的温度为28℃；所述孵育的时间为24h；

所述步骤S2中，所述采用硫酸铜溶液的浓度为20μM；所述处理的时间为1h；

所述步骤S3中，所述固定处理后还包括以下步骤：去除斑马鱼上的多聚甲醛溶液，然后采用PBST溶液对斑马鱼进行清洗；所述多聚甲醛溶液的质量浓度为4％；所述固定处理的时间为1h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述斑马鱼胚胎由巨噬细胞荧光转基因斑马鱼交配受精后培养得到。

5.一种利用斑马鱼为模型评价栀子水提取物活性的方法，其特征在于，以斑马鱼为模型评价栀子水提取物的抗血栓活性，包括以下步骤：

(1)将栀子水提取物与斑马鱼胚胎混合，对斑马鱼胚胎进行孵育；

(2)采用三氯化铁溶液对步骤(1)中经孵育后得到的斑马鱼进行处理，诱导血栓形成；

(3)从加入三氯化铁溶液开始，记录肠下静脉血管形成血栓的时间；

(4)以步骤(3)中得到肠下静脉血管血栓形成时间为评价指标，用于评价栀子水提取物的抗血栓活性。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述肠下静脉血管血栓形成时间≥8.84±0.10min，且差异系数P＜0.05时，提示栀子水提取物对斑马鱼具有抗血栓作用。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述孵育在光照条件下进行；所述孵育的温度为28℃；所述孵育的时间为48h；

所述步骤(2)中，所述三氯化铁溶液的浓度为60μg/mL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述斑马鱼胚胎由AB系斑马鱼交配受精后培养得到。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其特征在于，所述栀子水提取物由以下方法制备得到：将栀子粉碎，过筛，加入水，超声提取，得到提取液；将提取液进行过滤，得到滤液；将滤液进行减压浓缩，回收溶剂，冷冻干燥，得到栀子水提取物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述栀子的质量与水的体积的比值范围为1g∶5mL～10mL；所述过筛为过40目筛；所述超声提取的次数为3次，单次超声提取的时间范围为30min～60min；所述减压浓缩在温度范围为40℃～60℃下进行。