[发明专利]一种抗Engrailed-2蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗Engrailed‑2蛋白单克隆抗体及其应用，所述抗体具有独特的CDR区，针对Engrailed‑2蛋白具有优异的亲和力和中和活性。本发明进一步公开了单克隆抗体在制备非诊断目的的人前列腺癌检测试剂中的应用。由于本发明提供的抗体是特异性针对Engrailed‑2蛋白的单克隆抗体，具有特异性强、纯度高、均一性好的优点，极大的降低了免疫反应的交叉反应性，适用于人前列腺癌的早期筛查和特异性诊断。

技术领域

本发明公开了一种单克隆抗体，属于多肽技术领域。

背景技术

Engrailed-2蛋白是由EN2基因编码的一段含有331个氨基酸的同源盒蛋白，其生物学功能是作为转录因子与特定的DNA结合，从而在转录水平上起调节作用。绝大部分EN-2蛋白作为转录因子定位于核内，但是也发现有一少部分(5％)EN-2蛋白位于胞质内，能被细胞分泌和摄取，并参与调节转录和翻译。

Engrailed-2基因属于同源盒基因家族，其在进化中高度保守，主要在转录水平起调控作用。研究发现，En2基因在多种人类肿瘤中异常表达，在细胞的分化、增殖、凋亡中均发挥重要作用。近年来的研究发现，En2基因的异常表达与恶性肿瘤密切相关。

2018年，美国癌症协会公布了一份全世界癌症发生与死亡率的报告，报告指出全球癌症发生率前三的分别是肺癌、乳腺癌、和前列腺癌。在男性中，肺癌和前列腺癌是死亡率最高的两种癌症类型。此外，前列腺癌在全球105个国家都是发生率最高的类型，包括北美、南美、西欧和非洲大部分地区，可以算得上是席卷半个世界的癌症类型了。为此，研制出一种针对前列腺癌的诊断和治疗手段已经刻不容缓。

近年来，随着人口老龄化的发展和饮食结构改变等因素的变化，前列腺癌在中国的发病率也呈逐年上升趋势，已成为最常见的泌尿系肿瘤。我国前列腺癌患者的特点为发现就诊时大多已处于疾病中后期。故而对前列腺癌患者进行早期筛查，能够大幅提高疾病检出率，提高患者的生存期。而前列腺癌目前的标准检测试验PSA对前列腺癌诊断的敏感性仅为24％，而通过与血液或者尿液中Engrailed-2蛋白含量结合检查，可大幅提高前列腺癌的诊断敏感性，且能减少非必要的早期侵入性检查。

本发明的目的就是提供一种针对EN-2蛋白的特异性强、纯度高的单克隆抗体，并将其用于非诊断目的的人EN-2蛋白的早期检测。

发明内容

基于上述目的，本发明首先提供了一种抗Engrailed-2蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1的第26-33位、49-55位、88-96位氨基酸序列所示，所述单克隆抗体重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3的第26-35位、50-65位、99-111位氨基酸序列所示，或者

所述单克隆抗体轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5的第24-34位、50-56位、92-98位氨基酸序列所示，所述单克隆抗体重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7的第26-35位、50-66位、99-111位氨基酸序列所示。

在一个优选的实施方案中，所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，本发明中一个优选的单克隆抗体被命名为5B7，或者

所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，在本发明中一个优选的的单克隆抗体被命名为37C3。

在一个更为优选的实施方案中，所述单克隆抗体轻链恒定区的氨基酸序列均如SEQ ID NO.9所示，所述单克隆抗体重链恒定区的氨基酸序列均如SEQ ID NO.11所示。