[发明专利]一种适合工厂化栽培的香菇菌种农香5号及其分子鉴定方法

权利要求书

1.一种香菇（Lentinula edodes）菌株‘农香5号’，其特征在于：该菌株的分类命名为：香菇（Lentinula edodes）农香5号，已于2019年12月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO: M 20191018。

2.一种如权利要求1所述的香菇‘农香5号’的分子标记鉴定方法，其特征在于：包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、特异片段PCR扩增、电泳检测，显示特异条带；

特异片段PCR扩增引物LeP1～LeP6的具体核苷酸序列为：

引物LeP1的正向序列为5’-GCGGACCTTGTCCGGTATAG-3’，反向序列为5’-TCCAGCGAATGGCTTCAAAC-3’；

引物LeP2的正向序列为5’- GGGCCATGCCAACGAGTATC -3’，反向序列为5’-GCAGGCGATGCGAATTGAAG -3’；

引物LeP3的正向序列为5’- TCGGTCTCGCCATCAAGTTC -3’，反向序列为5’-CTATCGCAAGTTCGGATTCG -3’；

引物LeP4的正向序列为5’- GGCAGAGGTTGCATCTAAAG -3’，反向序列为5’-ACAGATGGCTACTACGAACC -3’；

引物LeP5的正向序列为5’- GCGACGTCATAGGTCCTTTG -3’，反向序列为5’-CAGTAAGGATCTGGGCTATG -3’；

引物LeP6的正向序列为5’- AGCGCGGACATGTTAATCAG -3’，反向序列为5’-CGACGTCCTATCTGCTAATC -3’；

引物LeP1产生一条791 bp的条带，引物LeP2产生一条939 bp的条带，引物LeP3产生一条1409 bp的条带，引物LeP4产生一条1742 bp的条带，引物LeP5产生一条803 bp的条带，引物LeP6产生一条962bp的条带；6个引物同时检测得到对应大小的DNA标记条带，是香菇（Lentinus edodes）‘农香5号’的标记。

3.根据权利要求2所述的香菇（Lentinus edodes）‘农香5号’的分子标记鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系：1～1.5 μl含量80~150 ng的DNA，12.5μl Premix Taq，1 μl 浓度为10 μmol/L的正向引物，1 μl 浓度为10 μmol/L的反向引物，9～9.5 μlddH₂O，总体积25 μl；

PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；98℃变性10sec，Tm退火30 sec，72 ℃延伸时间X, 35个循环；72 ℃延伸10 min；

其中引物LeP1的Tm为57 ℃，72℃延伸时间X为50 sec；引物LeP2的Tm为58 ℃，72℃延伸时间X为1 min；引物LeP3的Tm为56 ℃，72℃延伸时间X为1 min 30 sec；引物LeP4的Tm为55 ℃，72℃延伸时间X为1 min 50 sec；引物LeP5的Tm为56 ℃，72℃延伸时间X为55 sec；引物LeP6的Tm为55 ℃，72℃延伸时间X为1 min。