[发明专利]诱导多潜能脂肪干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种诱导多潜能脂肪干细胞的方法，其培养过程中应用了无柄灵芝素F。所述方法步骤如下：（1）分离培养大鼠ADSCs；（2）成骨诱导分化：取生长状态良好的第3代ADSCs细胞，常规消化、终止消化、离心、重悬细胞，以100个/孔接种于预置有盖玻片的6孔板中，待其完全贴壁后将实验组换为成骨诱导培养基1进行成骨诱导培养1天，第2天换液,换成成骨诱导培养基2，继续成骨诱导7d;本发明创新地将无柄灵芝素F应用于将诱导多潜能脂肪干细胞诱导快速高效（8d）分化成为成骨细胞，而且由于无柄灵芝素F来源于无柄灵芝，其长期安全性有保障，具有直接应用于体内的潜力。

技术领域

本发明涉及一种诱导多潜能脂肪干细胞的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

成体干细胞是指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞,这种细胞能够自我更新并且能够分化形成该组织的细胞。成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态,在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。成体干细胞与胚胎干细胞相比,其增殖能力有限。就分化潜能而言,胚胎干细胞具有多能性,可形成体内多种细胞,而成体干细胞只能分化为某些特定组织的细胞类型。成体干细胞普遍存在,问题是如何寻找和分离各种组织特异性干细胞。成体干细胞经常位于特定的微环境中。微环境中的间质细胞能够产生一系列生长因子或配体,与干细胞相互作用,控制干细胞的更新和分化。

成体干细胞中研究的比较多的是骨髓间充质干细胞。然而,传统的取骨髓方法会给患者带来一些痛苦,通常需要全麻或椎管内麻醉,并且数量少,体外扩增耗费时间长,价格昂贵。动物体内有两种脂肪组织,一种是棕色脂肪组织,,一种是白色脂肪组织。主要分布于刚出生的动物肩脚部,而在体内分布分两种,一种为皮下脂肪,另一种为内脏脂肪。目前,国内外学者已分别从这两种脂肪组织中获得了脂肪干细胞。鉴于脂肪干细胞具有易获得性、安全、可迅速扩增及多向分化能力等特点,其将成为具有广阔治疗应用前景的一类成体干细胞。

脂肪干细胞具有向脂肪细胞,肌细胞、软骨细胞、骨细胞及神经细胞等分化的能力如,分化的机制尚不清楚。骨科常见疾病如骨折、骨肿瘤、骨结核等均能造成骨质缺损，常须行植骨治疗。骨组织工程技术可用来修复人体缺损的骨组织脂肪干细胞可能作为骨组织工程的种子细胞，提高其成骨分化效率，是亟待解决的问题。

本发明旨在提供一种诱导多潜能脂肪干细胞的方法，具体为向高效诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化，具有很大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种诱导多潜能脂肪干细胞的方法，具体为向高效诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化，具有很大的应用潜力。

无柄灵芝Ganoderma resinaceum Boud又名圆孔灵芝、扁灵芝、 树芝、三秀灵芝等，作为灵芝属的1个种，与赤芝、紫芝一样，长期 被用于预防和治疗各类疾病。杨桥芬等从无柄灵芝中分离出数个化合 物，其中无柄灵芝素F是1个新的杂萜。无柄灵芝素F呈黄色固体 状，分子式为：C₂₀H₂₈O₆。空间相关结构如下所示：

本发明团队意外发现无柄灵芝素F可以应用于诱导多潜能脂肪 干细胞，具体为向高效诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化，在骨组织工 程技术上具有很大的应用潜力。

本研发团队首次将无柄灵芝素F应用于将诱导多潜能脂肪干细胞诱导分化成为成骨细胞，作为骨组织工程的种子细胞，提高其成骨分化效率，具有非常重要的意义。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种诱导多潜能脂肪干细胞的方法，其包括：

培养过程中应用了无柄灵芝素F。

作为优选，其步骤如下：