[发明专利]一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG及其应用

说明书

一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明经筛选得到一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.18513。此细胞株分泌的单克隆抗体，对氯苯那敏具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为1ng/mL），可实现对抗过敏类保健产品中氯苯那敏残留量的检测，为保健食品中氯苯那敏残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。本发明还成功合成了氯苯那敏人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原。

技术领域

本发明涉及一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

马来酸氯苯那敏(Chlorphenamine)，化学名N，N-二甲基-7-(4-氯苯基)-2-吡啶丙胺顺丁烯二酸盐，又名扑尔敏，组胺 Hl 受体拮抗剂，能对抗过敏反应所致的毛细血管扩张，降低毛细血管的通透性，缓解支气管平滑肌收缩所致的喘息，该品种抗组胺作用较持久，也具有明显的中枢抑制作用，能增加麻醉药、镇痛药、催眠药和局麻药的作用，主要在肝脏代谢。其临床上适用于皮肤过敏症，如荨麻疹、湿疹、皮炎、药疹、皮肤瘙痒症、神经性皮炎、虫咬症、目光性皮炎。也可用于过敏性鼻炎、血管舒缩性鼻炎、药物及食物过敏。

临床应用中马来酸氯苯那敏主要不良反应为嗜睡、疲劳、乏力、口鼻咽喉干燥、痰液粘稠等，日使用过量,可能出现心悸、皮肤瘀斑、出血倾向。因此，对马来酸氯苯那敏检测方法的研究，对其制剂特别是复方制剂含量的稳定性和均匀性，具有重要的意义。

酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，然而得到高亲和力和高特异性的单克隆抗体是免疫学检测的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

发明内容

本发明的目的是提供一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG，由该细胞株制备的抗体对氯苯那敏具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立氯苯那敏的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏编号CGMCC No.18513。

氯苯那敏单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.18513的氯苯那敏单克隆抗体杂交瘤细胞株CBG分泌产生。

所述氯苯那敏单克隆抗体的应用，用于食品中安乃近及其代谢物残留物的检测。具体用于抗过敏类保健产品检测中氯苯那敏残留的分析检测。

本发明提供的分泌抗氯苯那敏单克隆抗体的杂交瘤细胞株CBG的制备基本步骤为：

（1）半抗原CPM的合成：

合成路线如下：

在-65℃下，将化合物1（11.0 g，40.0 mmol）溶于THF（110 mL）溶液，在氮气保护下逐滴加入正丁基锂（32.0 ml，80.0 mmol）。将灰色溶液在-65℃下搅拌30min，加入四溴丁酸乙酯（11.7g，60.0mmol）。将反应温热至室温过夜。然后将反应混合物用水淬灭。分离各层，水相用乙醚洗涤。合并的有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到呈黄色油状的5-（4-氯苯基）-7-（二甲氨基）-5-（吡啶-2-基）庚酸乙酯（15.3g）称为化合物2，收率：98.1％。