[发明专利]基于数字PCR无创产前检测胎儿21、18、13三体综合征的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于数字PCR无创产前检测胎儿21、18、13三体综合征的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)从待测样本孕妇外周血中获得游离DNA，作为待测基因组DNA；

(2)选择人类第21号、第18号和第13号染色体的检测位点，分别设计用于扩增和检测目标染色体的特异性引物和Taqman探针；选择人类第8号、第2号染色体的检测位点，分别设计用于扩增和检测参照染色体的特异性引物和Taqman探针；

其中，所述用于扩增和检测目标染色体的特异性引物和Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：36所示；所述用于扩增和检测参照染色体的特异性引物和Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：37～SEQ ID NO：48所示；

(3)配制数字PCR扩增反应体系，以步骤(1)所述的待测基因组DNA为模板，利用步骤(2)所述的特异性引物和Taqman探针进行数字PCR扩增和检测；

(4)根据数字PCR的荧光信号，分别得到待测样本的第21号染色体的拷贝数a₂₁、第18号染色体的拷贝数a₁₈、第13号染色体的拷贝数a₁₃和参照染色体的拷贝数b；

其中，参照染色体的拷贝数b为待测样本的第2号染色体的拷贝数b₂和第8号染色体的拷贝数b₈的平均值；

(5)分别计算待测样本第21号染色体的拷贝数a₂₁、第18号染色体的拷贝数a₁₈、第13号染色体的拷贝数a₁₃占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比y₂₁、y₁₈和y₁₃；

(6)分别计算待测样本的第21号、第18号和第13号染色体的Z-score：(Z-score)₂₁＝(y₂₁-m)/σ_m；(Z-score)₁₈＝(y₁₈-n)/σ_n；(Z-score)₁₃＝(y₁₃-p)/σ_p；其中，

m为三体综合征阴性样本的第21号染色体的拷贝数a₂₁占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的平均值；

n为三体综合征阴性样本的第18号染色体的拷贝数a₁₈占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的平均值；

p为三体综合征阴性样本的第13号染色体的拷贝数a₁₃占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的平均值；

σ_m为三体综合征阴性样本的第21号染色体的拷贝数a₂₁占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的标准差；

σ_n为三体综合征阴性样本的第18号染色体的拷贝数a₁₈占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的标准差；

σ_p为三体综合征阴性样本的第13号染色体的拷贝数a₁₃占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的标准差；

(7)根据待测样本的第21号、第18号和第13号染色体的Z-score值分别判断待测样本的第21号染色体、第18号染色体或第13号染色体的数目是否存在异常。