[发明专利]miRNA-199核酸抑制物及其在翼状胬肉中的应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及miRNA‑199核酸抑制物及其在翼状胬肉中的应用。所述核酸抑制物为分别针对miR‑199a‑3p和miR‑199a‑5p的成熟miRNA设计并合成的小片段单链RNA。本发明首次发现，miR‑199a‑3p inhibitor、miR‑199a‑5p inhibitor能够分别通过抑制miR‑199a‑3p和miR‑199a‑5p的表达，抑制结膜上皮细胞迁移、EMT发生，促进细胞的凋亡作用，从而达到抑制翼状胬肉发生发展的作用，这对翼状胬肉治疗新方法的建立具有重要的意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及miR-199a核酸抑制物的构建及其在翼状胬肉中的应用。

背景技术

翼状胬肉是常见的眼表疾病，在我国汉族人群中的患病率高达2％～5％。主要是由于睑裂部球结膜及结膜下组织变性、肥厚、增生，其头部多呈三角形，侵及角膜，并向角膜中央生长。多位于鼻侧，偶位于颞侧，当增生的结膜下组织覆盖瞳孔，会影响患者的视力，严重者可致盲。翼状胬肉病因复杂涉及多种因素，如氧化损伤，免疫异常，炎症反应和角膜缘干细胞功能障碍，细胞凋亡，人乳头状瘤病毒以及遗传因素等，也可能是以上因素联合作用的结果。翼状胬肉的病理表现有类似上皮肿瘤的生物学特性，其组织上皮细胞增生活性高、增殖速度快，凋亡减少，细胞迁移能力增加，呈现出上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的特点。多见于户外劳动者，以渔民、农民发病最多，与风尘、烟雾、紫外线等长期的慢性刺激有关。

翼状胬肉目前常用的治疗手段为外科手术切除法，但这种方法为有创性治疗，术后需要一定的恢复时间，且复发率很高，随翼状胬肉体积较大、进展速度增快，对手术方法的操作要求也有所增加。目前临床上辅以手术运用的药物主要有丝裂霉素和强力霉素，两种药物都属于抗血管生成药物，两种药物的治疗针对性有限，且仅用于术后防翼状胬肉的复发，而且丝裂霉素毒性较大，因此许多眼科医师一直致力于其发病机制的研究和治疗方式的改良，以期改善临床治疗防护的效果。近年来，鉴于microRNA(miRNA)具有高敏感性、不易降解、易于检测等优势，miRNA在翼状胬肉发病机制中的作用逐渐受到重视。

miRNA是一类长度为22bp上下的广泛存在真核生物体内的内源性非编码单链小分RNA，通过与目标基因3’端的非编码区完全或不完全互补配对，在转录后水平对靶基因的表达进行调控(降解mRNA或抑制其翻译)，在细胞增殖、迁移、分化、凋亡等细胞活动中发挥着重要的作用。目前已有研究表明miRNAs的异常表达与翼状胬肉的发生、发展密切相关。而miR-199a-3p和miR-199a-5p作为miR-199家族的重要成员，推动了许多组织纤维化的发展进程。研究表明，基于miRNA的基因治疗方法可以作为一种有效的翼状胬肉治疗手段。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种含miRNA-199核酸抑制物及其在翼状胬肉中的应用。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

miR-199a-3p inhibitor和miR-199a-5p inhibitor，所述miR-199a-3pinhibitor是针对miR-199a-3p成熟miRNA设计并合成的小片段单链RNA，所述miR-199a-5pinhibitor是针对miR-199a-5p成熟miRNA设计并合成的小片段单链RNA，所述小片段单链RNA的序列与相应的miRNA序列反向互补。

上述方案中，所述的miR-199a-3p成熟miRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述的miR-199a-5p成熟miRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。