[发明专利]基于铁蛋白与preS1抗原基因融合表达的疫苗

说明书

本申请实施例公开了一种乙型肝炎疫苗。所述乙型肝炎疫苗包括：融合蛋白，所述融合蛋白包括乙肝病毒表面抗原肽段和铁蛋白，所述乙肝病毒表面抗原肽段和铁蛋白由连接子连接。所述连接子为柔性连接子。所述铁蛋白为细菌铁蛋白。所述乙肝病毒表面抗原肽段包括preS1肽段。

技术领域

本申请涉及乙肝疫苗技术领域，特别涉及铁蛋白纳米乙肝疫苗制备方法。

背景技术

乙型肝炎是一种严重危害人类健康并广为流传的疾病，目前，普遍接种疫苗是控制乙肝的有效措施。乙肝前S1(PreS1)区域为乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)外膜蛋白的重要组成部分，在HBV感染肝细胞和机体免疫应答方面起重要作用。PreS1肽段在慢性乙肝感染的患者体内的免疫耐受程度较低，但是其免疫原性也较低，难以诱导高的抗体应答。

目前的研究目前有报道的乙肝病毒疫苗主要包含HBsAg、preS1、preS2和HBcAg任意一种或者几种抗原肽段，再加上一些具有免疫增强作用的细胞因子等。但是对于乙肝患者的免疫耐受和激活HBV特异性细胞免疫的效果还有待提高，因此需要制备一种乙肝疫苗，能获得显著提高的免疫原性，并且能够诱导较高的免疫应答。

发明内容

本申请实施例之一提供一种乙型肝炎疫苗。所述乙型肝炎疫苗包括：乙肝病毒表面抗原肽段和铁蛋白，所述乙肝病毒表面抗原肽段和铁蛋白由连接子连接。所述连接子为柔性连接子。所述铁蛋白为细菌铁蛋白。所述乙肝病毒表面抗原肽段包括preS1肽段。

在一些实施例中，所述所述融合蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：3有至少99％，98％，或95％的相似性；优选的，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：3。

在一些实施例中，所述的乙型肝炎疫苗，还包括药学上可接受的载体和/或佐剂。所述佐剂为CpG寡核苷酸。

在一些实施例中，所述乙型肝炎疫苗引发针对乙肝病毒preS1的抗体应答。

在一些实施例中，所述乙型肝炎疫苗在小鼠中可以引发针对preS1的抗体应答；优选的，所述乙型肝炎疫苗在小鼠中可以于14天使得应答抗体浓度超过0.4ug/ml，所述乙型肝炎疫苗在小鼠中可以于21天使得应答抗体浓度超过10ug/ml，或者所述乙型肝炎疫苗在小鼠中可以于35天使得应答抗体浓度超过18ug/ml。

在一些实施例中，所述乙型肝炎疫苗在小鼠中可以引发针对preS1的抗体应答；优选的，所述乙型肝炎疫苗在野生型C57BL/6小鼠中，在500pmol抗原剂量，30ugCpG佐剂剂量，皮下免疫2次，间隔2周的条件下，可以在初次免疫后第14天使得应答抗体浓度达到约0.6ug/ml，第21天使得应答抗体浓度达到约12ug/ml，第35天使得应答抗体浓度达到约22ug/ml。

在一些实施例中，所述乙型肝炎疫苗在慢性乙型肝炎感染小鼠模型中可以引发针对preS1的抗体应答；优选的，所述乙型肝炎疫苗在AAV-HBV1.3制备的慢性感染小鼠中，在500pmol抗原剂量，30μg CpG佐剂剂量，皮下免疫3次，间隔2周的条件下，可以在初次免疫后第14天使得应答抗体浓度达到约2.8ug/ml，第28天使得应答抗体浓度达到约15ug/ml，第42天使得应答抗体浓度达到约38ug/ml。

本申请实施例之一提供一种编码融合蛋白的核酸分子，所述核酸分子可以编码所述的融合蛋白。

本申请实施例之一提供包含融合蛋白的纳米颗粒的制备方法，该方法包括：在细胞或体外系统中表达所述的核酸分子。

本申请实施例之一提供一种药物组合物，包括所述的乙型肝炎疫苗。所述药物组合物用于制备预防或治疗乙型肝炎的药物。

本申请还提供了一种重组细胞，包含所述的核酸分子。

本申请还提供一种诱导产生免疫反应的方法，包括使用所述的乙型肝炎疫苗诱导人体或动物体产生免疫反应。