[发明专利]测定藻细胞中岩藻黄素含量的方法

权利要求书

1.一种藻细胞中岩藻黄素含量的分析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

S1、取若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品；

S2、通过化学法分别测定所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品的提取液中岩藻黄素的含量；

S3、拉曼光谱分别测定所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品中单个藻细胞中岩藻黄素的特征峰总面积；

S4、分别测定所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品中藻细胞的密度，根据步骤S2得到的岩藻黄素的含量分别计算单个藻细胞中岩藻黄素的含量，并建立所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品中单个藻细胞中岩藻黄素的特征峰总面积和单个藻细胞中岩藻黄素的含量的线性回归方程；

S5、拉曼光谱测定待测藻细胞样品的单个藻细胞中岩藻黄素的特征峰总面积，根据S4中得到的所述线性回归方程，计算所述待测藻细胞样品单个藻细胞中岩藻黄素的含量，作为所述待测藻细胞中岩藻黄素的含量；

步骤S3中，所述拉曼光谱的方法包括采用全细胞扫描模式采集所述藻细胞样品中10-100个藻细胞的拉曼光谱图，以其平均的特征峰峰面积作为若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品中单个藻细胞中岩藻黄素的特征峰总面积；

其中，所述全细胞扫描模式包括假定聚焦面为一个平面，以与它平行的方向为x和y轴，并以0.1-5μm步长沿着x和y轴的方向依次进行拉曼光谱扫描，然后将扫描得到的光谱图进行叠加成像处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在进行步骤S2之前，该方法还包括，对所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品分别进行预处理；

其中，所述预处理的方法包括：分别将所述若干不同岩藻黄素含量的藻细胞样品进行固液分离，得到藻泥，并将所述藻泥重悬在磷酸盐缓冲液或NaCl溶液中；和/或

步骤S5中，在进行拉曼光谱测定前，该方法还包括，对所述待测藻细胞样品进行预处理；

其中，所述预处理的方法包括：将所述待测藻细胞样品进行固液分离，得到藻泥，并将所述藻泥重悬在磷酸盐缓冲液或NaCl溶液中。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，所述化学法为液相色谱法、分光光度法、薄层色谱法、质谱法、毛细管电泳法中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤S2中，所述化学法为高效液相色谱法。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述岩藻黄素的特征峰为在拉曼位移1011cm^-1或附近处出现的-CH₃水平振动吸收峰，在拉曼位移1155cm^-1或附近处出现的C-C键拉伸振动吸收峰和拉曼位移1525cm^-1或附近处出现的C＝C键伸缩振动吸收峰。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述拉曼光谱的测定条件包括：到达样品上的激光功率为0.01-100mW，单次采集的积分时间为0.01-100s，物镜为10-100倍。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，激光波长选自532nm、633nm或785nm。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述藻细胞为硅藻纲、褐藻纲、金藻纲、黄绿藻纲和定鞭藻纲中的一种。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述藻细胞为硅藻纲褐指藻属中的一种。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述藻细胞为三角褐指藻。