[发明专利]一种用于检测运动模式的多重基因试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种用于检测运动模式的多重基因试剂盒及其使用方法。本发明采用多重PCR结合电泳分析方法，同步快速定性检测与爆发力和肌肉耐力相关的ACTN3和ADRB3基因上2个单核苷酸多态性(SNP)位点。检测步骤：(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸；(2)采用步骤1所述细胞采集卡或核酸为模板，加入到反应体系中进行PCR扩增；(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离2个SNP位点、3个人类基因组DNA内参基因及1个PCR反应内参的PCR产物；(4)结果分析判读。本发明的优势是快速、灵敏度高、重复性好、特异性强、通量高、成本低。可根据运动模式的检测结果科学地制定健身计划，提升健身效率，为增加用户健身动力和持续力提供参考。图2为摘要附图。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其是涉及一种与运动模式相关的单核苷酸多态性的引物组合物、多重基因检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

人的运动能力高低是受到诸如外部环境因素(如营养、训练水平等)、遗传因素等多种因素影响的，而且杰出的运动能力很大程度上来由遗传决定。近年来，随着生物学技术高速的发展，相关的方法和技术手段在运动能力(比如爆发力素质和耐力素质)相关基因多态性的研究领域中也备受关注。在运动能力相关基因多态性研究中表明，杰出运动能力是受多基因因素影响的，每个基因的变化都会对特定的运动能力表型产生较小的影响，但贡献大小不一定相同，最后每个基因变化产生的效果共同影响着特定的运动能力表型。

ACTN3 R577X的基因多态性与爆发力素质的关系是一个研究热点。ACTN3(辅肌动蛋白3)是骨骼肌II型快肌纤维Z线表达的一种结构蛋白，起到铆点的作用，与细肌丝互相连接，维持着肌纤维的有序排列并在肌纤维收缩的过程中起到调节的功能。ACTN3基因 R577X多态性(rs1815739)存在3种基因型，分别为RR型、RX型和XX型。当ACTN3 R577X为XX基因型时，ACTN3则会出现缺失。有研究发现，ACTN3基因R577X多态性与杰出爆发力素质存在关联，认为RR基因型的运动员的肌肉力量和爆发力素质要强于XX 型的运动员，因此也有学者认为ACTN3 R577X可能可以作为选拔优秀速度或力量型运动员的分子标记。

杰出耐力素质与基因多态性关联的研究在杰出运动能力相关基因多态性研究中开展的最为广泛、最为深入，涉及的相关基因位点也是最多的。肾上腺素受体基因就是其中一类候选基因。其中ADRB3 基因编码一种肾上腺素能受体(AdrenalineReceptors,ADR)，主要表达于脂肪组织中，与代谢和心血管能力有关。Santiago等研究报道了 ADRB3的Trp64Arg多态性(rs4994)与杰出耐力素质的关系，同样发现优秀耐力运动员的Arg等位基因的比例显著高于普通人。因此，可以通过基因检测选择更适合自己体质的运动方式，在此基础上科学地制定健身计划，提升健身效率，增加用户健身动力和持续力。

发明内容

本发明提供了一种快速、灵敏度高、重复性好、准确性高、特异性强、通量高、成本低的运动模式相关基因检测试剂盒及其使用方法。

具体地，本发明公开了一种检测运动模式相关基因的试剂盒，包括如下步骤：

(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸。其中，保存于细胞采集卡上的口腔脱落细胞，可不需进行核酸提取，直接用于PCR扩增，节省了核酸提取的时间；

(2)以细胞采集卡或提取的核酸为模板进行多重PCR扩增。

(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离2个SNP位点及4个内参。本发明采用毛细电泳分离PCR产物：在96孔样品板中配制电泳样品，取高纯甲酰胺8.7μL，标准品SIZE-500 0.3μL，PCR产物1μL，混匀离心。将配制好的电泳样品置于3500基因分析仪中，按操作说明进行毛细电泳。

(4)根据所设计的每个检测位点的片段长度进行结果分析。本试剂盒包含以下几个组分：Primer Mix、PCR反应液和DNA/RNA-free 水。