[发明专利]一种细胞转染试剂及其应用

说明书

本发明属于生物技术与基因治疗领域，涉及一种细胞转染试剂及其应用，具体涉及一种细胞转染试剂及其在重组腺相关病毒载体生产中的应用。所述细胞转染试剂包括溶质PEI“MAX”、辅助试剂PBS和溶剂。使用本发明公开的细胞转染试剂进行重组腺相关病毒载体的生产，可以大大的提高病毒载体的产率，且降低了生产成本。

技术领域

本发明属于生物技术与基因治疗领域，涉及一种细胞转染试剂及其应用，具体涉及一种细胞转染试剂及其在重组腺相关病毒载体生产中的应用。

背景技术

基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的一种方法。而将外源的基因导入生物细胞内必须借助一定的技术方法或载体。重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated viral，AAV)由于具有低免疫原性，体内的感染效率极高，不同血清型AAV可以靶向心脏，肝脏，骨骼肌等组织，具有广泛的应用价值。

然而，AAV生产成本极高限制了其应用范围。James A.Allay采用传统钙转质粒工艺生产AAV单个细胞产量只能达到6.0×10³vgs，且质粒用量大，耗材用量大，纯化繁琐，极大地降低了相关科研人员工作效率^[1]。目前已有一些文献(例如Marc-André Robert，YongHong Chen等)报导了PEI转染质粒的方法生产AAV^[2,3]，但是这些报道的技术依然存在如下问题：1)产量仍较低，单个细胞产量只有10⁴～10⁵vgs；2)生产成本高(质粒用量高，耗材用量大)；3)生产周期偏长。

参考文献

[1]ALLAY J A,SLEEP S,LONG S,et al.Good manufacturing practiceproduction of self-complementary serotype 8adeno-associated viral vector fora hemophilia B clinical trial[J].Human gene therapy,2011,22(5):595-604.

[2]ROBERT M A,CHAHAL P S,AUDY A,et al.Manufacturing of recombinantadeno-associated viruses using mammalian expression platforms[J].Biotechnology journal,2017,12(3):

[3]CHEN Y H,KEISER M S,DAVIDSON B L.Adeno-Associated VirusProduction,Purification,and Titering[J].Current protocols in mouse biology,2018,8(4):e56.

发明内容

本发明克服了常规钙转染试剂和PEI转染试剂转染效率低，转染稳定性差等问题，提供了一种改良的PEI转染试剂及其在重组腺相关病毒载体(AAV)生产中的应用。

具体的，本发明采用以下技术方案：

本发明第一个方面公开了一种细胞转染试剂，所述试剂包括溶质PEI“MAX”、辅助试剂PBS和溶剂。

线性聚乙烯亚胺盐酸盐(Linear Polyethylenimine Hydrochloride，PEI“MAX”)是线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000的升级产品，是一种功能更为强大的瞬时转染试剂。与PEI25000的区别在于：1)完全水解(去乙酰化)2)PEI 25000的盐酸盐形式，具更高的水溶特性3)含更长连续性乙烯亚胺片段，其质子化氮水平比PEI25000提高11％以上。

优选的，所述溶质PEI“MAX”的浓度为1-10mg/mL。