[发明专利]一种大肠杆菌菌株及其生物合成吡喃香豆素和呋喃香豆素的方法有效
| 申请号： | 201911268651.8 | 申请日： | 2019-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN112941000B | 公开（公告）日： | 2022-10-21 |
| 发明（设计）人： | 徐岷涓;徐俊;步绪亮;贺贝贝;翁静怡 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P17/18;C12P17/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 胡晶 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 菌株 及其 生物 合成 吡喃香豆素 呋喃 香豆素 方法 | ||
1.一种大肠杆菌菌株，其特征在于，所述菌株为具有一个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌BL21，所述的苯并吡喃生物合成相关基因是
或者，所述菌株为具有两个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌BL21，所述的苯并吡喃生物合成相关基因是
所述的苯并吡喃生物合成合成相关基因为来源于
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌菌株，其特征在于，所述菌株为含有质粒pCDF-Duet-ximD或pCDF-Duet-ximD-ximE的菌株。
3.根据权利要求2所述的大肠杆菌菌株，其特征在于，所述质粒pCDF-Duet-ximD的序列如SEQ ID NO.2所示；所述质粒pCDF-Duet-ximD-ximE的序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一种根据权利要求1-3任一项所述的大肠杆菌菌株在生产吡喃香豆素和呋喃香豆素中的应用，其特征在于，所述的应用为：具有一个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌菌株生产的呋喃香豆素为印度榅桲素或二氢欧山芹素；具有两个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌菌株生产的吡喃香豆素为日本前胡醇或lomatin。
5.一种吡喃香豆素和呋喃香豆素的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1-3任一项所述的大肠杆菌菌株接入培养基中培养，然后加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后，并喂养底物，萃取即得；具有一个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌菌株生产的呋喃香豆素为印度榅桲素或二氢欧山芹素，具有两个苯并吡喃生物合成相关基因的大肠杆菌菌株生产的吡喃香豆素为日本前胡醇或lomatin。
6.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于，所述大肠杆菌菌株接入含0.2%葡萄糖的LB培养基中；所述诱导过程为：待OD600达到0.6-1.0时加入终浓度为0.02-0.05 mM的IPTG诱导，且在诱导1-2小时后加入底物。
7.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于，所述诱导的温度为16-20℃，摇床转速为160-200 rpm。
8.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于，所述底物为终浓度50-100 mg/L 的7-去甲基软木花椒素或王草酚。
9.根据权利要求5或6所述的生产方法，其特征在于，所述培养基中还包括100 μg/mL链霉素。
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