[发明专利]盐耐受的木糖苷酶突变体T326DH328D及制备和用途

说明书

本发明公开了一种盐耐受的木糖苷酶突变体T326DH328D及制备和用途，该突变体T326DH328D的氨基酸序列由野生木糖苷酶HJ14GH43第326位的苏氨酸和第328位的组氨酸均突变为天冬氨酸获得，其序列如SEQ ID NO.1所示，该盐不为NaCl。与野生酶HJ14GH43相比，本发明的突变酶T326DH328D在高浓度Na₂SO₄和(NH₄)₂SO₄中的稳定性得到了增强，经10.0～30.0％(w/v)的Na₂SO₄处理后，其活性为106～131％，经15.0～30.0％(w/v)的(NH₄)₂SO₄处理后，其活性为133～151％。因此，本发明的盐稳定性改良的木糖苷酶突变体T326DH328D可应用于农业、制革、污水处理等行业。

技术领域

本发明涉及一种木糖苷酶突变体，具体涉及一种盐耐受的木糖苷酶突变体T326DH328D及制备和用途。

背景技术

木糖可作为微生物等生物利用的碳源，或作为原料生产乙醇、乳酸、木糖醇等。木糖主要以木聚糖的形式广泛存在于植物的细胞壁中，木聚糖约占植物细胞干重的15％～35％。除了木聚糖外，植物的糖蛋白中也含有木糖，动物体内的蛋白聚糖也含有木糖。通过水解木聚糖可获得木糖：内切木聚糖酶(endo-1,4-β-D-xylanase，EC3.2.1.8)可随机地切割木聚糖的主链骨架，生成低聚木糖，而木糖苷酶(β-D-xylosidase，EC3.2.1.37)可将低聚木糖水解为木糖(Collins et al.FEMS Microbiology Reviews,2005,29:3～23.)。木糖苷酶也可作用于植物的糖蛋白和动物体内的蛋白聚糖，从而获得木糖(Leszczuk etal.Plant Physiology and Biochemistry,2019,139:681～690；Takagaki et al.TheJournal of Biological Chemistry,1990,265:854～860)。

硫酸铵是在农业种植中应用相对广泛的一种化肥；在皮革软化过程中，需要添加硫酸钠，在此过程中加入木聚糖酶，可达到促进皮纤维松散，提高成品革的柔软度、手感和物理机械性能的效果(如中国专利ZL201710574969.3公开的一种基于木聚糖酶作用的动物皮纤维松散方法)。除了农业种植和制革外，盐还广泛存在于其它的生产实践中，包括污水处理、洗涤、食品加工、造纸等。不耐盐的酶在应用上具有一定的局限性，例如，不耐盐的木糖苷酶将无法和硫酸钠同时使用，不利于皮革软化工艺的改良。因此，为了使酶具有更好的应用性，需要提高酶在盐中的稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐耐受的木糖苷酶突变体T326DH328D及制备和用途，该突变体解决了现有酶在高盐浓度下不具有良好的稳定性的问题，具有耐盐性，经高盐浓度处理后仍具有很好的酶活性。

为了达到上述目的，本发明提供了一种盐耐受的木糖苷酶突变体T326DH328D，该突变体T326DH328D的氨基酸序列由野生木糖苷酶HJ14GH43第326位的苏氨酸和第328位的组氨酸均突变为天冬氨酸获得，其序列如SEQ ID NO.1所示，该盐不为NaCl。

本发明还提供了一种编码所述的木糖苷酶突变体T326DH328D的基因t326dh328d，该基因t326dh328d的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种含有所述的基因t326dh328d的重组载体。

优选地，所述重组载体采用pEasy-E1。

本发明还提供了一种含有所述的基因t326dh328d的重组菌。

优选地，所述重组菌采用的宿主细胞包含：大肠杆菌BL21。