[发明专利]一种增敏阻断缓冲液及其用途

说明书

本申请属于诊断试剂技术领域，公开了一种增敏阻断缓冲液，包含缓冲液、0.2％～10％(v/v)乙醇、0.1％～5％(w/v)PEG6000、0.01％～0.5％(w/v)羧甲基纤维素钠(M.W.90000)、0.005％～0.25％(w/v)泊洛沙姆188、0.05％～5％(w/v)的甜菜碱、0.1％(v/v)Tween20、0.045％(v/v)ProClin 300。缓冲液为pH5.8～8.0的磷酸缓冲盐溶液、pH6.8～8.2的HEPES缓冲盐溶液、pH6.1～7.5的PIPES缓冲盐溶液、pH6.5～7.9的MOPS缓冲盐溶液、pH7.1～9.0的Tris缓冲盐溶液。采用本发明所述增敏阻断缓冲液与待测样本同时孵育参与反应，检测结果的阴性标本的本底显著降低，阳性标本检测结果的信号值升高，在阻断非特异性与增敏特异性反应的双重作用下，检测结果的阳性样本信号值与阴性样本信号值的比值变大，提高了检测的灵敏度和特异度。本发明所述增敏阻断缓冲液可用于制备幽门螺杆菌尿液抗体检测盒的用途。

技术领域

本发明属于诊断试剂技术领域，具体涉及一种增敏阻断缓冲液、试剂盒及应用。

背景技术

免疫诊断(immunodiagnosis)是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态。免疫诊断试剂广泛应用于医院、第三方检测、血站、体检中心，主要用于感染类疾病检测、传染病检测、肿瘤检测、代谢标志物检测等。其中，免疫诊断包括放射免疫、酶联免疫、免疫层析、化学发光等。免疫诊断有以下几个特点：①特异性强，尽量不出现交叉反应，不出现假阳性，以保证诊断的准确性；②灵敏度高，能测出微量反应物质和轻微的异常变化，有利于早期诊断和排除可疑病例；③简便、快速、安全。

免疫层析分析(Immunochromatography assay,ICA)和酶联免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)作为免疫学分析中最常用且发展最为成熟的两大检测平台，因其简单、快速、方便、特异性强、成本低等优势被广泛应用于临床诊断领域，然而，这两种免疫学分析方法的最大局限性在于其检测灵敏度和特异度偏低，难以对微量目标待测物进行准确的分析，难以满足某些实际应用的需求。在一些特定的免疫检测项目上，如何提高这两大免疫学检测方法的灵敏度和特异度已成为这些检测项目亟待解决的主要问题。既往研究表明优化检测信号、降低背景信号，是提高分析方法灵敏度的有效途径之一，本研究拟从配方优化着手，提高了检测信号灵敏度和特异度，结果是优化的增敏阻断缓冲液改善了两大传统免疫检测平台的灵敏度和特异度。

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)，1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功，经过各国学者30年来研究证实，Hp在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等消化道疾病致病中起到重要作用。大量流行病学调查证实，自然人群中Hp的感染率相当高，在全球人群的感染率超过50％，而且随着年龄的增加有递增趋势。幽门螺杆菌寄生在胃黏膜组织中，67％～ 80％的胃溃疡和95％的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的。2017年10月27 日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单，幽门螺杆菌(感染) 在一类致癌物清单中。预防和控制胃癌已日益引起人们的关注。因此，国内外普遍共识认为及早发现幽门螺杆菌感染者，及时而有效地用抗菌素根除幽门螺杆菌，对预防和控制幽门螺杆菌引起的胃病甚至胃癌有重大意义。

检测Hp感染的方法有侵入性和非侵入性两类。侵入性方法依赖胃镜活检，包括快速尿素酶试验(RUT)、胃黏膜直接涂片染色镜检、胃黏膜组织切片染色镜检、细菌培养、基因检测、免疫快速尿素酶试验(IRUT)等。而非侵入性检测方法不依赖内镜检查，包括13C或14C尿素呼气试验(UBT)、粪便抗原检测、血清抗体检测等。由于侵入性方法采样需要通过做胃镜的手段来实现，因患者接受性差而受到限制，不能作为大面积筛查方法。而非侵入性方法，操作简单、临床上使用较普遍。目前尚未有幽门螺杆菌抗体检测试剂盒在临床上使用，主要原因之一为尿液抗体含量低导致常规检测方法灵敏度达不到要求，且有其他干扰物的存在易形成交叉干扰，对测试的特异性造成影响。