[发明专利]一种恩度体内控释药物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种恩度体内控释药物，该控释药物采用红细胞包载恩度；其中红细胞表面修饰葡萄糖氧化酶；恩度的包载浓度为10～21.7U/10¹⁰cells。本发明将恩度的释放与血糖的浓度相关联，实现恩度在体内的多次释放，控制恩度在规律进食后血糖达到一定阈值后释放，能够有效控制恩度的释放量。

技术领域

本发明涉及一种肿瘤药物，具体涉及一种恩度体内控释药物。

背景技术

目前，恶性肿瘤是我国居民死亡的主要原因之一，随着发病率和病死率的增加，癌症已然成为一个重大的公共卫生问题。肿瘤血管生存是一个非常复杂的过程，促进和抑制血管生成的不同因子之间的调节失衡是导致肿瘤新生血管形成和肿瘤生长的关键因素。抗血管生成治疗目前取得巨大进步。作为抗血管生成药物之一的恩度statin(重组人血管内皮抑制素，后称恩度)成为各种癌症治疗不可或缺的药物。

恩度是一种蛋白类药物，它能特异性抑制血管内皮细胞增殖和迁移，不仅可以显著抑制新血管生成，还能引起血管内皮细胞的生长周期阻滞和细胞凋亡。然而其体内生物半衰期很短(10小时左右)，血液中无法长期稳定存在，而肿瘤抗血管生成治疗却需要相对高剂量持续给药，以维持有效血药浓度。从而大大降低了其使用效果，带来频繁用药。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种能够有效进行体内控释的治疗肿瘤的药物。

为了达到上述目的，本发明提供了一种恩度体内控释药物，该控释药物采用红细胞包载恩度；其中红细胞表面修饰葡萄糖氧化酶；恩度的包载浓度为10～21.7U/10¹⁰cells。

最佳的，恩度的包载浓度为21.23±0.46U/10¹⁰cells。

为了实现随着血糖日变化规律对恩度达到更好的释放控制，优选的，红细胞表面修饰的葡萄糖氧化酶的浓度为0.17±0.04mg/10¹⁰cells。

本发明还提供了上述恩度体内控释药物的制备过程，步骤如下：

(1)红细胞包载恩度：采用低渗-电穿孔法进行红细胞包载恩度，获得载药红细胞；

(2)生物素化葡萄糖氧化酶：将10mg生物素溶解于1mL二甲基甲酰胺中，然后加入5mL葡萄糖氧化酶溶液(10mg/mL)及N，N'-羰基二咪唑，室温条件下搅拌1小时。然后，将这个溶液放到透析袋(14kDa)中，常温透析24小时。检测葡萄糖氧化酶浓度，并调整到4mg/mL。

(3)葡萄糖氧化酶修饰：将生物素化的葡萄糖氧化酶修饰在步骤(1)制备得到的载药红细胞表面。

其中，步骤(1)低渗-电穿孔法进行红细胞包载恩度包括以下步骤：

a、低渗：将红细胞离心，并在含有恩度的低渗溶液中重悬；低渗处理条件为：4℃下处理1-3小时；其中低渗溶液中恩度的浓度为5mg/mL；

b、电穿孔：将步骤a中处理后的红细胞于脉冲电压1200V，脉宽0.01ms下脉冲处理3次，每次10s；

c、高渗：将电穿孔后的载药红细胞离心，重悬于高渗溶液中，在37℃下放置30-60分钟；

d、等渗：在PBS缓冲液中洗涤两次以除去未包封的恩度，即得所述载药红细胞。

优选的，步骤a中处理时间为3小时。