[发明专利]一种北柴胡指纹图谱质量控制体系的建立方法

说明书

本发明涉及药材质量控制技术领域，尤其是一种北柴胡指纹图谱质量控制体系的建立方法，包括以下步骤：对照品溶液制备；供试品溶液制备：取北柴胡药材粉碎过40目筛，取粉末约1g，精密称定，加入70％甲醇20mL，置圆底烧瓶中，称定重量，回流提取30分钟，冷却至室温，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得；化合物测定；指纹图谱的测定；聚类分析；指纹图谱的建立；色谱峰的指认。本研究建立的北柴胡药材指纹图谱方法稳定、可靠、重现性好，可为北柴胡药材的质量评价提供依据。

技术领域

本发明涉及药材质量控制技术领域，尤其涉及一种北柴胡指纹图谱质量控制体系的建立方法。

背景技术

本品为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根，春、秋二季采挖，除去茎叶和泥沙，干燥，主产辽宁、甘肃、河北、河南。此外，陕西、内蒙古、山东等地亦产。北柴胡具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的功效。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛。现代药理学研究证明北柴胡具有抗炎、保肝、解热、镇痛等作用。其主要成分为挥发油类、柴胡皂苷类，其次含有黄酮类、木脂素类、香豆素类柴胡皂苷类主要为柴胡皂苷A、B、C、D；尚含3-O-乙酰基柴胡皂苷A、6-O-乙酰基柴胡皂苷A、柴胡皂苷E等。

参考图10，《中国药典》(2015年版)规定柴胡皂苷a(C₄₂H₆₈O₁₃)和柴胡皂苷d(C₄₂H₆₈O₁₃)的总量不得少于0.30％。但是该规定范围较为广泛，这将为产品的质量稳定均一和临床安全有效性带来很大隐患，需要更加严格控制药材的质量。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中药材质量控制不稳定的缺点，而提出的一种北柴胡指纹图谱质量控制体系的建立方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种北柴胡指纹图谱质量控制体系的建立方法，包括以下步骤：

步骤一对照品溶液制备

准确称量2.00mg的对照品，分别置于10mL量瓶中，加入适量50％甲醇溶解，并以50％甲醇定容，得到质量浓度为200μg/mL的对照品贮备液，进样前将对照品贮备液用50％甲醇稀释10倍，对照品为绿原酸(111831-200803)，柴胡皂苷a(110777-200303)，柴胡皂苷d(110778-200403)，芦丁(103512-200601)；

步骤二供试品溶液制备

取北柴胡药材粉碎过40目筛，取粉末约1g，精密称定，加入70％甲醇20mL，置圆底烧瓶中，称定重量，回流提取30分钟，冷却至室温，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得；

步骤三化合物测定

通过HPLC-TOF/MS正负总离子流色谱图检测对照品溶液、供试品溶液，进行对比分析得出结果；

步骤四指纹图谱的测定

取多批北柴胡药材分别标号作为样本进行指纹图谱研究，将多批药材指纹图谱的AIA数据文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版相似度软件，以其中一批北柴胡药材的指纹图谱为参照图谱，采用多样本平均数矢量综合作为共有模式矢量，时间宽度设定为0.10，多点校正后，确定主要的色谱特征峰，选取峰面积较大、出峰时间适中且稳定的峰作为参照峰，计算各色谱峰相对于其的峰面积比，若某一指纹图谱在某相对保留时间处无峰，相对峰面积为零，仍给相应的编号，以保证各色谱指纹图谱都有相同的色谱峰数；

步骤五聚类分析