[发明专利]一种虎杖指纹图谱质量控制体系的建立方法

说明书

本发明涉及药材质量控制技术领域，尤其是一种虎杖指纹图谱质量控制体系的建立方法，包括以下步骤：对照品溶液制备；供试品溶液制备：取虎杖药材粉碎过40目筛，取粉末约1g，精密称定，加入甲醇25mL，置圆底烧瓶中，称定重量，回流提取30分钟，冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得；化合物测定；指纹图谱的测定；聚类分析；指纹图谱的建立；色谱峰的指认。本研究建立的虎杖药材指纹图谱方法稳定、可靠、重现性好，可为虎杖药材的质量评价提供依据。

技术领域

本发明涉及药材质量控制技术领域，尤其涉及一种虎杖指纹图谱质量控制体系的建立方法。

背景技术

虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎和根，春、秋二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切短段或厚片，晒干。其植物资源丰富，分布于全国各地，主产于河北、西北、华东、华中、华南、西南等地区。虎杖为常用中药，具有祛风利湿，散瘀定痛、止咳化痰等功效。药理研究表明虎杖具有良好的抗菌作用，虎杖中大黄素、大黄素葡萄糖苷和白藜芦醇苷对金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌有抑菌作用，虎杖水提液及大黄素具有良好的抗病毒作用其活性成分主要含有蒽醌类化合物，其中以游离型为主(含量约1.4％)，结合型的含量较低(约0.6％)。游离蒽醌衍生物主要有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等，结合型的主要有大黄素甲醚-8-葡萄糖苷等；茋类化合物白藜芦醇及其白藜芦醇苷；此外还含有黄酮类化合物、香豆素类化合物、综合性鞣酸等。

对于虎杖的质量研究报道较多，《中国药典》(2015年版)对虎杖药材的质量控制主要从性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及虎杖苷和大黄素的含量进行规定。文献报道多采用HPLC法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素、大黄素甲醚及总黄酮的含量，以及采用酚 -硫酸比色法测定多糖的含量，亦有釆用HPLC指纹图谱技术评价虎杖药材质量的报道。

参考图10，《中国药典》(2015年版)规定本品含大黄素(C₁₅H₁₀O₅) 不得少于0.60％，含虎杖苷(C₂₀H₂₂O₈)不得少于0.15％。该范围较大，各批次间虎杖苷、大黄素的含量差异较大。这将为产品的质量稳定均一和临床安全有效性带来很大的隐患，需要更加严格控制药材的质量。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中药材质量控制不稳定的缺点，而提出的一种虎杖指纹图谱质量控制体系的建立方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种虎杖指纹图谱质量控制体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一对照品溶液制备

准确称量2.00mg的对照品，分别置于10mL量瓶中，加入适量 50％甲醇溶解，并以50％甲醇定容，得到质量浓度为200μg/mL的对照品贮备液，进样前将对照品贮备液用50％甲醇稀释10倍，对照品为虎杖苷(111575-200502)，大黄素(110756-200110)，大黄素甲醚110764-200608)，芦荟大黄素(110795-200605)；

步骤二供试品溶液制备

取虎杖药材粉碎过40目筛，取粉末约1g，精密称定，加入甲醇 25mL，置圆底烧瓶中，称定重量，回流提取30分钟，冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得；

步骤三化合物测定

通过HPLC-TOF/MS正负总离子流色谱图检测对照品溶液、供试品溶液，进行对比分析得出结果；

步骤四指纹图谱的测定