[发明专利]一种鉴别茶树品种的引物、试剂盒及其鉴别方法

说明书

本发明涉及一种鉴别茶树品种的引物、试剂盒及鉴别方法，属于分子生物学领域。本申请鉴别的茶树品种有赣茶2号、上梅州和大面白，通过先筛选SSR序列，设计引物、筛选确定引物，再进行茶树品种鉴别。茶树品种鉴别方法为：提取待测茶树的基因组DNA；与引物进行PCR扩增反应；毛细管电泳检测扩增产物，根据特征条带220bp和232bp，鉴别茶树品种。本申请设计、筛选得到了鉴别所选三种茶树品种的引物，检测方法简单、快速，结果可靠，有利于所选茶树品种的保护和推广。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地，涉及一种鉴别茶树品种的引物、试剂盒及其鉴别方法。

背景技术

茶树广泛种植于全世界超过50个国家和地区，发挥着重要的经济作用。茶叶最早源于中国，且与咖啡、可可并称世界三大无酒精饮料。茶叶作为我国重要经济栽培作物之一，科学准确地对其开展茶树品种鉴定、遗传多样性分析和构建遗传连锁图谱，这对于茶树品种选育以及种质资源收集和保护具有重大意义。DNA分子标记能反映生物个体和种群之间基因组中DNA片段某种特异性差异，是从DNA水平上反映遗传多态性。利用分子标记的高多态性，结合相关分析、聚类分析等数量遗传分析手段，可以对不同亲缘品种进行分类，判断其亲缘关系，评价不同品种的异质性，进而划分杂交优势群。众多分子标记中,简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)标记,因其具有简便、快捷、重复性高、多态性高、共显性标记等优点而被广泛应用。

茶树品种是茶叶生产的基本材料，不同茶树品种其适宜种植区和适制的茶类不同，“婺绿”产区是中国绿茶金三角，所产绿茶品质优良，赣茶2号(鄣科1号)、上梅州、大面白3个茶树品种是以“婺绿”产区群体种为材料选育的国家级优良品种，制绿茶品质极优。但目前还没有快速、准确鉴别这几个茶树品种的方法。

发明内容

本申请解决了赣茶2号、上梅州和大面白三种茶树品种的鉴别问题，确定了所选茶树品种的指纹图谱位置。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一方面，本申请提供了一种鉴别茶树品种的引物，包括上游引物和下游引物，具体序列为：

上游引物：5′-CTTCGTCCTCCTCCTCTTTG-3′；

下游引物：5′-TCACATCATCAGCCTTGGGT-3′。

采用该组引物，能特异性鉴别赣茶2号、上梅州和大面白三个茶树品种，鉴别方法简单、快速，结果可靠。

优选地，引物鉴别的茶树品种包括：赣茶2号、上梅州和大面白。

优选地，所述引物的筛选方法为：

在茶树基因组序列中选择SSR位点，设计引物；

选择设计的引物进行PCR扩增，再采用琼脂糖凝胶电泳初筛、毛细管电泳复筛，得到鉴别茶树品种的引物。

优选地，所述引物对应的SSR位点的序列为：5′-GGTGGTGGTGGTGGTGGT-3′。

另一方面，本申请提供了一种鉴别茶树品种的试剂盒，该试剂盒包含前述的鉴别茶树品种的引物。

引物的特异性高，故含有该引物的试剂盒也能特异性鉴别茶树品种。

再一方面，本申请还提供了鉴别茶树品种的方法，包括以下步骤：

S1：提取待测茶树的基因组DNA；

S2：将步骤S1提取的DNA与引物进行PCR扩增反应；

S3：电泳检测步骤S2的扩增产物，根据特征条带，鉴别茶树品种。

该鉴别方法简单、快速，采用引物扩增、电泳后各茶树品种的特异性条带明显，结果准确。