[发明专利]构巢曲霉强启动子ANP1及应用

说明书

本发明公开了构巢曲霉强启动子ANP1及应用。本发明公开的构巢曲霉强启动子ANP1为下述a)或b)或c)：a)序列表中序列1所示的DNA分子，所述DNA分子具有启动子功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。实验证明，本发明的构巢曲霉强启动子ANP1具有启动子活性，能在驱动异源基因在构巢曲霉中的表达，为构建新的异源表达系统提供了更多的选择。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，构巢曲霉强启动子ANP1及应用。

背景技术

真菌产生丰富的次级代谢产物是现代天然药物的重要来源之一。基因组测序及生物信息学预测表明，真菌中存在大量次级代谢产物生物合成的基因簇，而且大多数处于沉默状态，如何有效激活这些沉默基因簇是研究人员关注的科学问题。启动子作为基础的转录调节元件，被广泛应用于高效异源表达系统的构建和合成途径改造中。然而，目前可用于真菌次级代谢产物合成基因的启动子很有限，所以启动子的分离，获取强有效的启动子对于开发更高效的异源表达系统有重要作用。

由于构巢曲霉可用启动子资源较少，所以在使用构巢曲霉作为遗传操作宿主时可供选择的启动子有限，一些常用在构巢曲霉分子操作中的启动子包括组成型启动子和诱导型启动子。其中组成型启动子gpdA启动子是最常用的异源表达系统启动元件，gpdA基因是构巢曲霉甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GPD)的编码基因，在糖酵解途径中催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化，形成1，3-二磷酸甘油酸。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有启动子活性的DNA分子。

本发明提供的DNA分子，其名称为ANP1，是下述a)或b)或c)：

a)序列表中序列1所示的DNA分子，所述DNA分子具有启动子功能；

b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；

c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次5min 0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次15min。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的ANP1核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的ANP1核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表达靶基因的启动子活性，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的ANP1核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％、95％以上的同一性。

本发明还提供了含有ANP1的生物材料，所述生物材料为下述B1)至B11)中的任一种：

B1)含有ANP1的表达盒；

B2)含有ANP1的重组载体；

B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；

B4)含有ANP1的重组微生物；

B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；