[发明专利]一种白喉毒素的核酸适配体DT05及其应用

说明书

本发明涉及一种白喉毒素的核酸适配体DT05及其应用，该核酸适配体DT05的序列为：5'‑GTCGCATGGAAGGAGCGACGAGGGACGGTCGCGCCGTGGCGCAGGCTAGGAGAGTACGCGCGGGACCGGCGGTCCAAGT‑3'。本发明的白喉毒素核酸适配体DT05能高亲和力、高特异性地与白喉毒素结合，同时作为拮抗剂能有效中和白喉毒素的毒性作用，缓解白喉毒素中毒的临床症状。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与白喉毒素特异性结合的高亲和力核酸适配体DT05及其应用。

背景技术

白喉是一种潜在的致命疾病，由白喉棒状杆菌感染及其分泌的强效白喉毒素(DT)引起。白喉棒状杆菌是一种革兰氏阳性细菌，白喉的病原体。白喉毒素的毒性作用主要是介导二磷酸腺苷核糖基化从而抑制延伸因子2(EF-2)，通过形成致病性咽假膜和使局部气道水肿，导致呼吸道等毒素生产部位的组织坏死。血源性白喉毒素播散还可引起颅神经功能障碍、周围神经病变和心脏毒性，这是50-75％白喉病例死亡的原因。

虽然白喉类毒素疫苗的广泛接种已大大降低了白喉病例的发病率，但白喉的威胁还没有消失，白喉仍在部分国家和地区流行。最近在海地、尼日利亚、南非、印度尼西亚、老挝、孟加拉国、也门和印度尼西亚还发生了白喉的周期性暴发，病死率可高达10％。国际旅行和易感人群迁移也加剧了白喉成为全球疾病的风险。为此，我国国家质量监督检验检疫总局就多次发布公告提醒“防范多国白喉疫情传入中国”。因此，对于白喉感染的发生和治疗，我国不应掉以轻心，应做好充分准备。

治疗白喉，最有效的方法是及时注射白喉抗毒素(DAT)以中和白喉毒素并防止进一步的组织损伤，结合抗生素治疗以消除白喉杆菌并停止毒素的产生，可大大降低白喉的发病率和死亡率。目前DAT主要是马源白喉毒素抗体，由于有严重过敏反应的风险，并存在发生血清疾病和某些人畜共患病的危险，许多制造商已经停止生产，全球DAT的供应极为有限。因此，为了应对潜在的白喉发病风险和有效治疗白喉患者，亟需更加安全、高效的可拮抗白喉毒素毒性作用的拮抗剂。

适配体又被称为“合成抗体”、“化学抗体”，其化学本质是一条单链寡核酸分子(ssDNA或RNA)折叠成特定三维结构与靶物质高亲和力和高特异性结合。适配体的获得是通过指数富集配体的系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponentialenrichment，SELEX)的体外筛选过程。核酸适配体具有高亲和力、高特异性、可体外合成、可通过修饰改变其功能及药代动力学特性、无免疫原性、经济等特点。基于上述优势开发的核酸适配体药物可特异性阻断靶标的生物功能，例如作为毒素的中和拮抗剂、细胞因子的抑制剂、阻断转录因子的肿瘤治疗药物等。因此，筛选出高特异性、高亲和力结合白喉毒素的核酸适配体作为其毒性作用的拮抗剂具有重要的科研和临床价值。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种具有高特异性和高亲和力的白喉毒素的核酸适配体DT05；本发明的另一目的在于提供所述核酸适配体DT05在制备样品中白喉毒素的分离富集试剂中、在制备白喉毒素检测试剂或试剂盒中以及在制备中和或拮抗白喉毒素药物中等多方面的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：一种白喉毒素的核酸适配体DT05，它的序列如下所示：

5'-GTCGCATGGAAGGAGCGACGAGGGACGGTCGCGCCGTGGCGCAGGCTAGGAGAGTACGCGCGGGACCGGCGGTCCAAGT-3'(SEQ ID NO:1)。

所述的白喉毒素的核酸适配体DT05是基于核酸适配体的体外SELEX筛选技术获得，其中利用羧基磁珠作为固相介质，以白喉毒素为靶标，通过白喉毒素磁珠从ssDNA文库中筛选得到与白喉毒素特异性结合的核酸适配体，命名为核酸适配体DT05。

本发明所述的白喉毒素的核酸适配体DT05，在其5’端或3’端可进行荧光基团、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇等化学修饰。