[发明专利]一种利用豆粕水解液高密度培养副干酪乳杆菌的方法

说明书

本发明涉及一种利用豆粕水解液高密度培养副干酪乳杆菌的方法，具体包括以下步骤：S1：将甘油管菌种进行划线得到单菌落，单菌落在种子培养基上进行种子培养并保藏；S2：将S1中保藏的甘油管接种于活化培养基上，静置培养形成一级种子液；S3：吸取一定量的一级种子液接到种子扩大培养基上，静置培养形成二级种子液；S4：将二级种子液接入含有豆粕水解液的发酵培养基中厌氧发酵，得到副干酪乳杆菌发酵液。本发明提出的培养副干酪乳杆菌的方法是采用豆粕水解液作为氮源，替代或减少酵母粉等昂贵氮源的用量，降低副干酪乳杆菌的生产成本；通过优化培养基成分、发酵条件，能从发酵液中获得高浓度副干酪乳杆菌，同时发酵液中无不溶性物质，便于浓缩。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，特别是涉及一种利用豆粕水解液高密度培养副干酪乳杆菌的方法。

背景技术

副干酪乳杆菌属于革兰氏阳性菌，是一种益生菌，对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用，特别是在幼龄动物的肠道保健和疾病的防疫和治疗上有突出的表现。许多企业将其制成微生态饲料添加剂。研究表明：副干酪乳杆菌不仅对很多细菌有拮抗作用，有的菌株还可抑制酵母及霉菌的生长。Nemcova等报道L.paracasei可显著降低刚断奶幼猪体内梭菌属和肠杆菌的数量。Schwenninger等用副干酪乳杆菌副干酪亚种L.paracaseisubsp.paracasei和詹氏丙酸细菌Propionibacteriumjensenii的混合培养物添加到酸奶中，在6℃下也能够有效抑制酵母腐败菌、霉菌等的生长。在副干酪乳杆菌生产过程中，培养基的配方及发酵条件的控制至关重要，直接影响着发酵液中的活菌数量。

传统副干酪乳杆菌生产方法中，发酵液中的副干酪乳杆菌总菌数不高，用于生产的发酵培养基中常用玉米粉、豆饼粉来当微生物生长所需的碳源和氮源，由于玉米粉、豆饼粉水溶性不好，一方面不利于微生物利用，另一方面发酵液残留的这些不溶性成分，会引起后处理困难，使得副干酪乳杆菌生产成本较高。又或者采用酵母膏及酵母浸粉这类昂贵氮源，造成资源浪费。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明提出了一种利用豆粕水解液高密度培养副干酪乳杆菌的方法，解决现有副干酪乳杆菌制备成本高，发酵液残留不溶性成分造成后期处理困难的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种利用豆粕水解液高密度培养副干酪乳杆菌的方法，具体包括以下步骤：

S1：将甘油管菌种进行划线得到单菌落，再将得到的单菌落在种子培养基上进行种子培养，并保藏；

S2：取S1中保藏的甘油管接种于活化培养基上，静置培养形成一级种子液；

S3：吸取一定量的一级种子液接到种子扩大培养基上，静置培养形成二级种子液；

S4：将二级种子液接入含有豆粕水解液的发酵培养基中厌氧发酵，得到副干酪乳杆菌发酵液。

进一步的，S1中在甘油管菌种的斜面培养基上划线得到单菌落，所述斜面培养基包括如下体积百分比组分：葡萄糖0.5-1％、酵母浸粉0.5-1％、胰蛋白胨0.5-1％、牛肉浸粉0.2-1％，硫酸镁0.01-0.02％、硫酸锰0.005-0.008％、乙酸钠0.5-0.1％、柠檬酸铵0.2-0.5％、磷酸氢二钾0.2-1％、吐温-80 0.1-0.5％、琼脂粉1.5％、余量为水。

进一步的，所述斜面培养基的制备过程为：将葡萄糖、酵母浸粉、胰蛋白胨、牛肉浸粉、硫酸镁、硫酸锰、乙酸钠、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、吐温-80、琼脂粉及水按配方称取混合溶解，制成培养液，加热升温灭菌一定时间后，分装至平板中，待冷却放入37℃培养箱过夜培养，选出无杂菌平板放入4℃冰箱待用。