[发明专利]一种Hp四价抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种Hp四价抗原，其为将UreB，VacA，CagA和HpaA四种抗原蛋白对应的核苷酸经优化后，克隆到pET28a，pET30或pColdII原核表达载体内，经原核表达菌BL21，Rosetta或OrigamiB表达得到的抗原，利用该Hp四价抗原制备得到了含有Hp四价抗原的卵黄抗体的鸡蛋、能够高效阻断Hp定植和感染的卵黄抗体；该卵黄抗体相比于现有的产品具有良好的溶解性能且产品纯度较高，该新型的含有四价抗原Hp的卵黄抗体能够阻断Hp的定植，且有效抑制Hp的活性，能够高效防治Hp感染引起的胃肠道疾。能广泛应用于制造食品、食品添加剂、医药和保健食品中。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种含有Hp的四价抗原及其制备方法与应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种螺旋形、对生长条件要求苛刻的革兰氏阴性微需氧杆菌，是迄今发现能够在人胃内生存的唯一微生物种类。Hp感染能导致消化性溃疡、胃炎、胃癌等胃肠性疾病，且与冠心病糖尿病、肝胆疾病等胃外疾病均具有相关性。流行病学显示65％-80％的胃溃疡和90％以上的十二指肠溃疡是由Hp感染引起的。且Hp感染是我国胃癌的主要病因，Hp感染患者15％-20％发生消化性溃疡，1％发生胃恶性肿瘤(胃癌、胃粘膜相关B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤))。

Hp在不同种族、不同地区的人群中均有感染，全球感染率高达50％左右，尤以发展中国家为甚，我国感染率为40％～90％，平均感染率高达59％。且我国的感染年龄早于发达国家近20年，20-40岁的感染率为45.4％～63.6％，70岁以上高达78.9％。

幽门螺杆菌杆菌病主要Hp破坏胃细胞引起的，目前实验及理论证实这主要与Hp体内表达尿酶素(urease，Ure)、空泡细胞毒素(vacuolating cytotoxinA，VacA)以及细胞毒素相关基因A(cytotoxin－associated protein，CagA)这三种蛋白相关。Ure是螺旋杆菌属所富含的一种酶，可以改变胃内局部强酸性环境，对该菌属在胃内寄生和致病起重要作用，目前发现的所有的Hp细菌均含有尿素酶。UreB是构成Ure的活性中心，保守性和抗原性好，是理想的Hp疫苗靶点。VacA存在于所有的Hp菌株的基因组中，其表达产物是Hp分泌的唯一蛋白毒素，是重要毒力因子，可以改变细胞膜，形成跨膜阴离子通道，导致酸性水解酶的释放，引起细胞肿胀，伴随细胞膜融合，最终使上皮细胞产生空泡样变性。CagA是Hp毒力标志之一，与Hp致病性及临床相关疾病严重程度相关。

对Hp的研究表明，Hp在胃粘膜的定植，靠的是其表面配体与胃粘膜上皮细胞受体的特异性结合。HpaA是Hp的鞭毛鞘膜蛋白，是重要的粘附素之一，它几乎存在所有临床分离的Hp菌株表面，具有表面暴露、抗原高度保守等特点。另外，HpaA疫苗免疫动物能诱导保护性用。

世界卫生组织(WHO)于1994年就已将Hp列入I类致癌因子。随着对Hp认识的不断深入，于2015年《京都全球共识》明确Hp胃炎为一种慢性传染性疾病，建议对于Hp感染者，除非有抗衡因素(高龄、基础疾病、再感染等)，都应进行根除治疗。而目前全球共识所推荐的标准三联疗法(PPI+克拉霉素+阿霉素/甲硝唑)治愈率仅为 70％左右，然而近年报道我国Hp原发耐药率克拉霉素20％～50％，甲硝唑为40％～70％，且Hp可对这些抗菌药物发生二重、三重或多重耐药，克拉霉素和甲硝唑双重耐药率25％，故该方案已不再适合用于我国。目前在第五次全国共识中明确推荐含铋剂四联疗法被推荐为首选方法。铋剂对Hp耐药菌株可额外地增加30％～40％的根除率，不会发生耐药，从而减少抗生素的过度使用，但是这种方法仅适合与短期使用。因此传统的治疗Hp感染的四联疗法靶向性低，抗生素易产生耐药，且副作用多，复发率高。故目前临床上和市场上缺乏安全有效的抗Hp感染解决方案。