[发明专利]一种诱导中国水仙产生花青素的方法及其应用

权利要求书

1.一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）百合ANS基因编码区全长序列的克隆；

（2）构建ANS基因pC2300-35S::ANS植物表达载体；

（3）基因枪法将pC2300-35S::ANS植物表达载体导入中国水仙受体材料中；

（4）受体材料中ANS基因瞬时表达诱导产生花青素的鉴定；

所述步骤（1）中百合ANS基因编码区全长序列的克隆，具体为：根据NCBI中百合ANS基因编码区序列设计含限制性酶切位点的特异性引物，以百合cDNA为模板克隆ANS基因全长；

所述百合ANS基因编码区序列如SEQ ID NO:1所示；所述特异性引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

2.根据权利要求1所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所述步骤（2）中构建ANS基因pC2300-35S::ANS植物表达载体具体为：ANS全长基因和pC2300-35S质粒，先分别用BamH I和Pst I双酶切，然后进行连接，获得重组质粒pC2300-35S::ANS植物表达载体。

3.根据权利要求1所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所上述步骤（3）基因枪法将pC2300-35s::ANS植物表达载体导入中国水仙受体材料中，包括以下具体步骤：

1）受体材料预处理；

2）基因枪子弹准备；

3）基因枪轰击受体材料；

4）轰击后处理。

4.根据权利要求3所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所述步骤1）中受体材料预处理为：轰击前4-8h受体材料先接种于渗透培养基中预处理；所述渗透培养基为：MS+2mg/L2,4-D+0.2mol/L山梨醇+0.2mol/L甘露醇+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，Ph5.8；所述受体材料为：中国水仙花瓣、副冠、鳞茎盘中的一种。

5.根据权利要求3所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所述步骤2）中基因枪子弹准备为：60mg/ml金粉或钨粉悬浮液50ul、1ug/ul的植物表达载体DNA5ul、 2.5M CaCl₂ 50ul、0.1M亚精胺20ul。

6.根据权利要求3所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所述步骤3）基因枪轰击受体材料，其中鳞茎盘轰击参数为轰击距离6cm，气压1350psi，花瓣和副冠的轰击参数为轰击距离9cm，1100psi。

7.根据权利要求3所述的一种诱导中国水仙产生红色花青素的方法，其特征在于：所述步骤4）轰击后处理为：轰击后受体材料放置在渗透培养基上渗透处理。

8.如权利要求1所述的方法在诱导中国水仙产生红色花青素中的应用。