[发明专利]一种杀虫组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种杀虫组合物及其应用，包括杀虫基因序列和辣根素，所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列；所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列；所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列。通过微量注射的方法导入试虫体内后24h后，再进行辣根素LC₂₀熏蒸处理，72h死亡率分别达到85.56％，67.78％，58.89％，均显著高于辣根素LC₂₀单独熏蒸处理，致死作用显著。以饲喂法分别饲喂dsRNACOXⅠ或dsRNACOXⅡ或dsRNACOXⅢ与辣根素LC₂₀熏蒸联合处理提高玉米象的防效显著，AITC用药量减少。

技术领域

发明涉及生物技术领域，具体涉及一种杀虫组合物及其应用。

背景技术

玉米象(Sitophilus zeamais)属鞘翅目(Coleoptera)象甲科(Curculionidae)，是一种重要 的仓储物初期性害虫，被列为头号毁灭性贮粮害虫。在仓储害虫防治应用最为广泛的是 溴甲烷和磷化铝，而溴甲烷在发展中国家已被禁用，磷化铝产品由于其高毒、高风险， 在防除粮食仓储害虫时易发生中毒伤亡事故。

辣根(Armoracia rusticana)是十字花科辣根属植物，其主要挥发性成分为烯丙基 异硫氰酸酯(辣根素AITC)作为一种生物源熏蒸剂，具有低毒、易降解等特点，对储 粮害虫有较好的防效。吴华等(2007)采用锥形瓶法测定了AITC对玉米象、赤拟谷盗、 谷蠹和干鱼书虱等4种仓储害虫的生物活性，结果表明，AITC精油对四种仓储害虫都具 有较高的生物活性。

RNA干扰(RNAi)技术利用双链RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻 断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。目前RNAi已经成为了杀虫剂的靶标识 别与鉴定的有效工具，即通过RNAi降低预测靶标基因转录水平之后，测定虫体对于杀 虫剂的敏感性变化从而确定杀虫剂的靶标位点，同时也可以减少用药量，在生产实践中 提高害虫的致死作用。

细胞色素C氧化酶(COX)是真核生物线粒体内膜和需氧菌细胞膜电子传递链上的终端金属膜蛋白酶，负责细胞色素C到氧分子的电子传递功能，是线粒体氧化能力的关 键调节部位。由三个核心亚基(COXⅠ、Ⅱ、Ⅲ)以及十个小亚基组成。

发明内容

本发明的目的在于提供根据玉米象细胞色素C氧化酶(COX)三个核心亚基(COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢ)设计基因片段合成dsRNA与辣根素熏蒸(AITC)联合在害虫 防治中的作用。

一种杀虫组合物，包括杀虫基因序列和辣根素，所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列。

可选的，合成所述杀虫基因序列的引物包括SEQ ID NO：2所示的上游引物和SEQID NO：3所示的下游引物。

可选的，所述的杀虫基因序列根据NCBI数据库中玉米象细胞色素C氧化酶核心亚基Ⅰ基因(NCBI参考序列：NC_030764.1:1323-2864)设计的基因片段。

一种杀虫杀虫组合物，包括杀虫基因序列和辣根素，所述的基因序列如SEQ IDNO： 4所示，或至少包含SEQ ID NO：4所示序列90％的同一性的基因序列。

可选的，合成所述杀虫基因序列的引物包括SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQID NO：6所示的下游引物。

可选的，所述的杀虫基因序列根据NCBI数据库中玉米象细胞色素C氧化酶核心亚基Ⅱ基因(GENBANK登录号：KX783028)设计的基因片段。