[发明专利]超声波辅助酶法提取的百尾参多糖、其方法及应用

说明书

本发明公开了一种超声波辅助酶法提取的百尾参多糖、其方法及应用，是按质量份数取1份过60目筛后的百尾参粉末浸泡于15~50份的蒸馏水中并调pH值至3.5~7.0，于30~70℃下保温静置15~30 min；然后加入百尾参干粉质量0.1~10%的酶，于30~70℃下酶解0.5~3 h，得混合物；30~70℃下超声提取10~60 min；80~90℃下灭酶处理5~20 min；室温冷却，于3000~6000 rpm离心10~30 min，取上清液用旋转蒸发仪浓缩至1/2~1/5体积，然后加入4~5倍浓缩液体积的无水乙醇，于4℃下静置2~8h，5000~6000 rpm离心10~20 min，再经无水乙醇洗涤，冷冻干燥得到。本发明对肿瘤细胞具有毒性，对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒较好的抑制活性，提取率高，提取时间短，节约能源，环保。

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体来说涉及超声波辅助酶法提取的百尾参多糖，同时还涉及该超声波辅助酶法提取的百尾参多糖的方法，及该超声波辅助酶法提取的百尾参多糖对肿瘤细胞毒性和抗病毒领域的应用。

背景技术

多糖是由10个以上的单糖通过糖苷键连接形成的天然高分子聚合物，广泛存在于植物、动物及微生物中。它既是细胞的组成物质，又是调节各种生命活动的重要物质。研究发现植物多糖具有多种生理功能，如抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗凝血、降血糖、降血脂及调节免疫功能，并且对人体的毒副作用相对较小。多糖在医学领域的研究与应用越来越受到国内外专家学者的青睐，目前应用于临床的有香菇多糖、猪苓多糖、灵芝多糖、云芝多糖、黄芪多糖等。相关文献报道多糖还具有较好的抗植物病毒活性，如香菇多糖及其组合物具有较好的抗烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的活性，且具有诱导作物产生抗病力，抑制病毒侵染的作用，进而增加产量和提高品质的作用。因此，多糖已成为当前医药及农药研究的热点领域之一。

百尾参为百合科万寿竹属植物万寿竹(Disporum cantoniense(Lour.)Merr.)的根及根茎，为多年生草本植物，为苗族习用药材，是咳速停系列药物的主药，其味甘、淡，性平，具有润肺止咳、健脾消积的功效，用于虚损咳喘、痰中带血等症状。有关百尾参的研究主要集中在栽培方面，对其化学成分研究较少，主要含有甾体、酰胺及黄酮等成分；研究报道百尾参及其化学成分具有抗菌、抗氧化、抗炎镇痛及袪痰止咳等药理作用。

目前关于多糖提取工艺的研究极少，目前已公开的中国专利公开号CN104844720A，公开了“一种百尾参多糖的分离提取方法”，该方法是将干燥粉粹后的百尾参先用石油醚脱脂3h，再于高温下提取数次，每次数小时，最后用树脂脱色、Sevag试剂脱蛋白得到百尾参多糖；所得多糖具有较强的袪痰止咳及抗氧化活性。上述方法为百尾参多糖的开发提供了科学依据和实验基础，但是在工艺推广及工业化生产上仍存在以下不足：①传统水提法得率较低，且提取时间较长，能耗大，提取成本较高；②提取及纯化过程中使用大量的有机溶剂，带来了环境污染。

相对于传统水提法，使用酶处理超声辅助可在比较温和的条件下分解植物组织，破粹细胞，加速多糖的溶出，能快速提高得率。中国专利公开号CN101580553B，公开了一种酶法辅助提取蒺藜多糖的方法，该方法使用纤维素酶、木聚糖酶及果胶酶辅助提取蒺藜多糖，可使得率提高18-40.67％，纯度提高15-42％。中国专利公开号CN103319617A，公开了一种利用超声波协同酶法提取紫薯多糖的方法及应用，该方法利用超声波协同淀粉酶辅助提取紫薯多糖，可明显提高多糖的得率。中国专利公开号CN103145863A，公开了一种酶处理提取锁阳多糖的方法及锁阳多糖抗肿瘤制剂的制备，相对于传统方法，该方法可使多糖得率提高10-65％，多糖含量提高5-40％。中国专利公开号CN 104004108A，公开了一种酶解制备锁阳多糖的方法，该方法利用胃蛋白酶辅助提取锁阳多糖，可使多糖的得率提高95-273％。但尚未见到酶处理、超声处理或酶解超声辅助提取百尾参多糖对肿瘤细胞毒性、抗植物病毒活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种对肿瘤细胞具有毒性，对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒具有较好的抑制活性，得率高，提取时间短，节约能源，环保的超声波辅助酶法提取的百尾参多糖。