[发明专利]春兰miR159b在增强植物冷敏感性中的应用

说明书

本发明公开了一种春兰miR159b基因及其在增强植物冷敏感性中的应用。本发明从春兰栽培品种“宋梅”中获得miR159b的前体序列片段编码基因MIR159b，并在春兰中进行表达分析，随后将其构建至过表达载体导入目的植物中验证其功能，经筛选培养获得T3代植株，发现其幼苗期根系生长速度较野生型显著加快；将移入土壤60天的野生型和35S：MIR159b转基因植株经4℃低温胁迫后，发现转基因植株出现主花序下垂，不复直立，茎生叶下垂卷曲，基生叶变黄等表型，可见该基因在兰花及其它园艺植物生产中将有广泛的用途。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种春兰非编码RNA（核糖核酸）miR159b在增强植物冷敏感性中的应用。

背景技术

兰科（Orchidaceae）是开花植物中最大科之一，全世界有25000多种，约占所有开花植物的10%。春兰（Cymbidium goeringii）属于兰科兰属中的小花型地生兰种类，其花型奇特、花色淡雅，花香清幽，叶姿优美，观赏价值和经济价值极高。春兰对生长环境要求较高，在生长过程中极易受到高温、低温、干旱等恶劣环境影响，严重时，会导致园艺观赏品质下降，甚至植株死亡。因此，研究植物应对非生物胁迫的分子机制以及鉴定具有逆境应答功能的基因对春兰育种、生产及应用具有重要意义。而miR159在植物抗逆响应中扮演重要角色，可为植物的遗传改良提供重要依据。

MicroRNA159s（miR159s）是植物microRNAs中较为保守的古老家族之一，可参与植物生长发育、植物次生代谢、植物响应生物与非生物胁迫等多种生命活动过程。目前，对miR159的研究多集中于生长发育方面，逆境胁迫响应等所受关注相对较少。miR159可调控植物响应热胁迫，如，过表达miR159可增加小麦的热敏感性。而棉花中的miR159则在作物应对病原菌侵害的过程中起着重要作用。甘薯的miR159则可调控其应对盐胁迫。miR159同样是玉米、水稻、番茄等作物响应干旱胁迫的关键因子，但在水稻中的具体调控途径与品种相关，不同品种miR159的调控方式不同。目前，miR159在植物响应冷胁迫方面的作用尚未经过报道，因此，利用基因工程技术，将从春兰中克隆获得miR159b前体基因转入其它植物中，对于研究其功能具有重要意义，同时极具应用前景。

发明内容

本发明提供了一种春兰miR159b在增强植物冷敏感性中的应用。

一种春兰miR159b在增强植物冷敏感性中的应用，所述植物miR159b的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

优选的，所述植物为春兰。

具体方法为：将包含所述春兰miR159b的前体基因连接到载体上，通过农杆菌介导转化到野生型拟南芥“哥伦比亚”，筛选，培养，获得转基因植株。

由于miRNA本身很短，只有20bp左右，而前体基因相比较稍长一些，将其连接到载体上有利于拟南芥转化的实现，优选的，所述前体基因的序列如SEQ ID NO.3或SEQ IDNO.4所示。

本发明通过将春兰miR159b转化到野生型拟南芥“哥伦比亚”，经筛选培养获得T3代植株，发现其幼苗期根系生长速度较野生型显著加快；将移入土壤60天的野生型和35S：MIR159b转基因植株经4℃低温胁迫后，发现转基因植株出现主花序下垂，不复直立，茎生叶下垂卷曲，基生叶变黄等表型，可见该基因在兰花及其它园艺植物生产中将有广泛的用途。

附图说明