[发明专利]一种检测高油酸花生的方法及其应用

权利要求书

1.一种检测高油酸花生的方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）设计花生FAD2B基因特异性引物；

（2）分别提取普通花生和可能的高油酸花生的DNA并混合，以此混合DNA为模板，利用步骤（1）中的引物进行PCR扩增；

（3）利用CELI酶进行酶切，根据琼脂糖凝胶电泳的结果进行判断，判断方法为：设计的引物扩增片段大小为c，而产生变异的位点将c分成了a和b，从而经琼脂糖凝胶电泳，如果待检测花生为高油酸花生，可产生大小为a、b和c的条带，如果不是高油酸花生，则只产生c大小的条带；

所述步骤（1）中花生FAD2B基因特异性引物的序列为：

上游引物FAD2B-F：CTCATATGTTGTCTATGATCTCTTAA

下游引物FAD2B-R：GCGTATCAGTTATATGATGAAATGCC。

2.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法，其特征在于：所述步骤（2）中PCR反应的条件为90~98 ℃预变性 5 分钟；90~98 ℃变性30 秒，50~60 ℃退火 30 秒，68~72 ℃30秒，40个循环；68~72 ℃后延伸10 分钟；退火预变性90~99℃ 10分钟，70~90℃20秒，95个退火循环。

3.根据权利要求2所述的检测高油酸花生的方法，其特征在于：所述退火循环为从80℃开始，每个循环下降0.3℃，每个温度7秒。

4.根据权利要求1所述的检测高油酸花生的方法，其特征在于：所述步骤（3）中酶切的具体方法为：将CELI酶和PCR产物、双蒸水放入切割缓冲液中，在40~50 ℃下，酶切25~30分钟，加入反应终止液EDTA。