[发明专利]纳米超声造影剂及其制备方法

权利要求书

1.一种纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取能够自主合成伪空胞的浮游微生物，进行传代培养，富集所述浮游微生物；

将富集的所述浮游微生物置于培养基中，静置处理，收集浮在所述培养基上层的浮游微生物；

在所述浮游微生物中加入裂解液，混匀处理后，在离心力为280g～320g、温度为3℃～5℃的条件下进行第一次离心处理，离心时间为3.5h～4.5h，收集含有所述浮游微生物和乳白色伪空胞的上层混合液；在所述上层混合液中加入2～3倍体积的裂解液，混匀处理后在离心力不高于300g、离心时间不长于3h的条件下进行第二次离心处理，裂解目标浮游微生物，并收集上层乳白色的伪空胞；对剩余的溶液重复裂解液裂解-离心处理的操作，直至上层漂浮物全部为乳白色伪空胞；其中，离心处理的步骤中，后一次离心处理的离心力低于前一次离心处理的离心力，且后一次离心处理的离心时间短于前一次离心处理的离心时间。

2.如权利要求1所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，在裂解液裂解-离心处理的步骤之后，还包括：将收集的伪空胞置于试样管，并用PBS缓冲液保存，使用封口膜对所述试样管进行密封。

3.如权利要求1所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，获取能够自主合成伪空胞的浮游微生物，进行传代培养的步骤，包括：

获取能够自主合成伪空胞的浮游微生物原液，加入经消毒处理的微生物培养基中形成培养液，在温度为37℃～42℃、转速为120rpm～160rpm的条件下无菌培养，直至培养液变为粉白色；

将所述培养液分成多份后，补充新鲜的培养基继续培养，直至培养液再次变为粉白色，重复步骤0～N次，富集所述浮游微生物，其中，所述N为自然数。

4.如权利要求3所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，取微生物原液，加入经消毒处理的微生物培养基中形成培养液的步骤中，控制微生物原液和培养基的体积比，使加入所述微生物原液后的培养液中，微生物的菌体浓度为2×10⁵CFU/m～2×10⁶CFU/m。

5.如权利要求1至4任一项所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，将富集的所述浮游微生物置于培养基中，静置处理，收集浮在所述培养基上层的浮游微生物的步骤包括：

将富集的所述浮游微生物置于经消毒处理的分液容器中，静置3-4天，直到分液容器中的液体上层出现浮游微生物层，从所述分液容器中分离出上层优势浮游生物层及下层培养液；

将下层培养液再次倒入清洗后的分液容器中，静置处理，直到分液容器中的液体上层出现浮游微生物层，再次从培养液中分离出优势群体，重复该步骤1～3次。

6.如权利要求1至4任一项所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，在所述浮游微生物中加入裂解液的步骤中，按照浮游微生物与所述裂解液的体积比为1:(1～1.5)的比例，在所述浮游微生物中加入TMC裂解液。

7.如权利要求6所述的纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于，在所述浮游微生物中加入TMC裂解液的步骤中，在所述浮游微生物中加入等体积的TMC裂解液。