[发明专利]一种体外评估耐热植酸酶作用效果的方法

说明书

本发明属于酶制剂评估技术领域，涉及一种体外评估耐热植酸酶作用效果的方法，先测定待作用试样中的总磷的物质的量y₀；再向待作用试样中加入经高温处理后的耐热植酸酶酶液，模拟胃环境中的消化，之后模拟肠环境中的消化，然后测定试样经耐热植酸酶消化后的无机磷的物质的量y₂，并测定空白对照中试样的无机磷的物质的量y₁；再将y₀、y₂和y₁代入公式Ⅰ的y中，分别计算出待作用试样中的总磷含量p₀、试样经耐热植酸酶消化后的无机磷的含量p₂、空白对照中试样的无机磷的含量p₁；最后将p₀、p₂和p₁代入公式Ⅱ中计算出试样中耐热植酸酶的磷释放率P，并根据试样中耐热植酸酶的磷释放率P对耐热植酸酶对该试样的作用效果进行评估，具有简单、快速、准确、稳定、重现性好等优点。

技术领域

本发明属于酶制剂评估技术领域，具体涉及一种体外评估耐热植酸酶作用效果的方法。

背景技术

植酸酶已广泛用于畜禽水产等养殖行业，植酸酶添加到饲料中后，要经受饲料加工过程中的高温处理，饲料被采食后，植酸酶在酶解营养物质的同时需要耐受畜禽体内不同的pH环境，因此，酶解效果会受到诸多因素的影响。但关于植酸酶作用效果评估方法目前仍无统一的标准，使用较多的是仿生消化体系，但评估较多样品时周期仍非常长。

公开号为CN 106434850 A的发明专利公开了一种耐高温植酸酶活性评估方法，其具体通过在模拟胃环境中植酸酶作用饲料样品多释放的水溶性磷含量，对耐高温植酸酶的活性进行评估，但是其存在如下问题：1)该专利中认为耐高温植酸酶作用饲料样品多释放的水溶性磷含量越大，表明耐高温植酸酶活性越高，但是多释放的水溶性磷含量越多，即磷释放率越高，只能表明对评估原料的底物亲和力越好，降解效果越好，而同一种植酸酶对不同原料的降解效果不同，与原料中总磷含量、植酸磷结构等因素相关，因此，用耐高温植酸酶作用饲料样品多释放的水溶性磷含量表征耐高温植酸酶活性存在不准确性，且该专利中使用多释放的磷含量表示植酸酶活性，无法体现原料中总磷对该结果的影响；2)对酶制剂进行高温处理时，该专利采用的是高压灭菌锅，温度存在不稳定性，且只适用于固态酶制剂，不适用于液态酶制；3)该专利中仅模拟植酸酶在胃环境中的消化2h，而实际上，植酸酶添加到饲料中后，一般是先在胃中消化45min-1h，再进入肠中消化4h，因此，仅在体外胃环境中模拟消化与实际消化存在一定的差别，不能准确体现实际的消化情况。公开号为CN106706520A的发明专利公开了一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法，其同样存在上述问题。

发明内容

为了克服上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种简单、快速、高效、准确的体外评估耐热植酸酶作用效果的方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案为一种体外评估耐热植酸酶作用效果的方法，包括如下步骤：

1)绘制标准曲线，得到直线回归方程；

2)计算待作用试样中的总磷的物质的量y₀；

3)对耐热植酸酶制剂进行高温处理，得到经高温处理后的耐热植酸酶酶液；

4)向待作用试样中加入经高温处理后的耐热植酸酶酶液，然后添加pH2.5盐酸溶液模拟胃环境中的消化，再添加pH 5.5的乙酸缓冲液Ⅱ模拟肠环境中的消化，之后测定吸光值，并根据直线回归方程计算出试样经耐热植酸酶消化后的无机磷的物质的量y₂；

5)以等量的乙酸缓冲液Ⅱ替代经高温处理后的耐热植酸酶酶液作空白对照，按照步骤4)测定吸光值，并根据直线回归方程计算出空白对照中试样的无机磷的物质的量y₁；