[发明专利]一种杆菌肽及其组分的分析方法

说明书

本发明公开了一种新的杆菌肽(Bacitracin)组分及其高效液相色谱‑质谱(HPLC‑MS)分析方法。该组分经HPLC‑MS及二级质谱分析验证为双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A或双亚甲基化及乙基化的杆菌肽Y，这种新型的组分被命名为杆菌肽HZ(bacitracin HZ)。本发明揭示存在新的非蛋白质氨基酸，如2‑氨基‑3‑乙烯基‑5‑己烯酸、2‑氨基‑4‑乙烯基‑5‑己烯酸、3‑乙烯基半胱氨酸、2‑乙烯基半胱氨酸。杆菌肽HZ具有不同于常见杆菌肽组分的抗菌活性或毒性，有潜在的应用价值，并且该类化合物的结构确证也为严格控制杆菌肽的质量提供了研究基础。

技术背景

本发明涉及药物分析化学领域，具体而言，涉及一种杆菌肽及其组分的分析方法。

背景技术

杆菌肽(结构式结合图1和表1)是由枯草杆菌和地衣芽孢杆菌产生的多组分抗菌肽，能强烈抑制革兰氏阳性菌，主要用于治疗耐青霉素的葡萄球菌感染。杆菌肽具有特殊的抑菌机理，会干扰细菌细胞壁的合成，同时在肽聚糖的合成中抑制磷脂受体的再生，使得其具有抗菌谱广、不易产生耐药性等特性。在药用过程中添加锌离子以增强活性。

表1杆菌肽结构通式A和B的R_n的表达式

由于是发酵产品，杆菌肽组分较多，在《美国药典》40版中收录了杆菌肽A、B、C、F等组分，《欧洲药典》9.6版中收录了19种组分或有关物质，另外还有其他未知组分。而《美国药典》40版、《欧洲药典》9.6版采用的高效液相色谱法(磷酸氢二钾/乙腈/甲醇体系)选择非挥发性流动相体系，不适合直接进行质谱分析，无法实现在线确定未知组分的结构。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明中公布了一种杆菌肽及其组分的分析方法，该方法为高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析方法。经一级质谱及二级质谱分析验证这种杆菌肽为双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A或双亚甲基化及乙基化的杆菌肽Y，命名为杆菌肽HZ(bacitracin HZ)。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案包括：

本发明的第一方面是提供一种新的杆菌肽，命名为杆菌肽HZ(bacitracin HZ)。该种杆菌肽的组分为双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A或双亚甲基化及乙基化的杆菌肽Y。

进一步地，亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A的组成单元包括1位异亮氨酸、2位半胱氨酸、3位亮氨酸、4位谷氨酸、5位异亮氨酸、6位赖氨酸、7位鸟氨酸、8位异亮氨酸、9位苯丙氨酸、10位组氨酸、11位天冬氨酸、12位天冬酰胺，1位异亮氨酸与2位半胱氨酸形成噻唑啉环，6至12位氨基酸形成环7肽；双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A是指原杆菌肽A的1位异亮氨酸处的β’-甲基及γ’-甲基发生亚甲基化，2位半胱氨酸处的β”位发生乙烯基化，其结构如下：

或原杆菌肽A的1位异亮氨酸处的β’-甲基及γ’-甲基发生亚甲基化，2位半胱氨酸处的α”位发生乙烯基化，其结构如下：

进一步地，所述双亚甲基化及乙基化的杆菌肽Y的组成单元包括1位异亮氨酸、2位半胱氨酸、3位亮氨酸、4位谷氨酸、5位异亮氨酸、6位赖氨酸、7位鸟氨酸、8位异亮氨酸、9位苯丙氨酸、10位组氨酸、11位天冬氨酸、12位天冬酰胺，1位异亮氨酸与2位半胱氨酸形成噻唑环，6至12位氨基酸形成环7肽；双亚甲基化及乙基化的杆菌肽Y是指原杆菌肽Y的1位异亮氨酸处的β’-甲基及γ’-甲基发生亚甲基化，2位半胱氨酸处的β”位发生乙基化，其结构如下：

进一步地，双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A，β’及α”、β”-碳的构型是R构型或S构型。

进一步地，双亚甲基化及乙烯基化的杆菌肽A的组成氨基酸是L型或D型。