[发明专利]人肠癌原代细胞、应用和培养方法

说明书

本发明提供了人肠癌原代细胞、应用和培养方法，该人肠癌原代细胞命名为HCOC‑691，保藏号为CGMCC NO.18528。保藏地址为：中国，北京。本发明的人肠癌原代细胞可用于在癌症相关疾病的发病机理研究中的应用、在药物敏感性研究和检测中的应用以及在抗肿瘤药物研究中的应用。本方案与现有纯化培养过程所培养出的肿瘤原代细胞的细胞状态相比，该人肠癌原代细胞的细胞状态更好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及人肠癌原代细胞、应用和培养方法。

背景技术

肠癌是常见的消化道疾病，一般原代培养的肿瘤细胞由于组织刚刚离体，其生物学特性未发生很大变化，仍保留原遗传特性，基因保留量在90％以上，适用于生化分子实验和药物敏感性试验及机制探究相关试验，其数据更具有说服力。建立人肠癌原代细胞对于细胞株的建立、药敏检测实验、个性化治疗和肠癌的发病及其治疗机制的研究具有重要意义。

目前，通常单纯依靠酶消化法进行人肠癌原代细胞的获得。但是，此方法可能由于过度消化，会引起细胞状态差或者死亡，进而导致人肠癌原代细胞培养失败。

发明内容

本发明实施例提供了人肠癌原代细胞、应用和培养方法，能够培养出状态良好的人肠癌原代细胞。

为此，本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

第一方面，本发明提供了人肠癌原代细胞，其命名为人肠癌细胞HCOC-691，保藏号为CGMCC NO.18528。

优选地，

所述人肠癌原代细胞HCOC-691的核型为：染色体数目为49条，超二倍体核型。

第二方面，本发明提供了一种第一方面所述的人肠癌原代细胞在癌症相关疾病的发病机理研究中的应用。

第三方面，本发明还提供了一种第一方面所述的人肠癌原代细胞在抗肿瘤药物研究中的应用。

第四方面，本发明还提供了一种第一方面所述的人肠癌原代细胞在药物敏感性研究和检测中的应用。

第五方面，本发明提供了一种人肠癌原代细胞的培养方法，包括：

利用清洗液清洗肠癌组织，其中，所述清洗液包括：含有抗生素的生理盐水；

利用细胞分散酶对清洗后的肠癌组织进行消化处理；

利用细胞消化液将所述细胞分散酶消化处理后得到的细胞进行消化处理；

利用含血清培养基和无血清培养基培养所述细胞消化液消化处理后得到的细胞，其中，所述含血清培养基，包括：DF培养基、10％胎牛血清FBS和所述抗生素，所述无血清培养基包括：DF培养基、添加物和所述抗生素；

当培养的细胞的汇合度达到70-90％时，采用胰酶差时消化法、差时贴壁法、反复贴壁法相结合的方式对培养的细胞进行纯化，获得人肠癌原代细胞。

具体地，细胞分散酶可以为：含有1-10mg/ml的胶原酶Ⅰ和0.2-2mg/ml透明质酸酶的混合物。

针对胶原酶Ⅰ的浓度来说，1-10mg/ml是指1mg/ml到10mg/ml范围内的任一浓度，比如，1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、3mg/ml、3.3mg/ml、3.5mg/ml、4mg/ml、4.5mg/ml、5mg/ml、5.5mg/ml、6mg/ml、6.6mg/ml、7mg/ml、7.5mg/ml、8mg/ml、8.4mg/ml、8.8mg/ml、9mg/ml、9.5mg/ml以及10mg/ml。