[发明专利]一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）：动物肌肉、脂肪和内脏样品的提取：称取3.0g样品并转移至陶瓷研钵中，加入60µL、浓度为1.0µg/mL的d5-克霉唑标准溶液，再加入60目硅藻土5g并充分研磨，转移研磨好的样品于10mL的萃取池中，进行加速溶剂萃取，萃取条件为：萃取溶剂为环己烷和乙酸乙酯，体积比为1:1，萃取温度100℃，加热并静态萃取5min，对萃取池体积30%的萃取溶剂进行氮气吹扫60s后得到萃取液；将萃取液转移至50mL圆底烧瓶中，在35℃水浴中，通过旋转蒸发仪浓缩至小于3mL，转移剩余液体至10mL刻度离心管中，补加体积比为1:1的环己烷和乙酸乙酯至3mL，制得待净化液，备用；

步骤（2）：样品的净化：凝胶渗透色谱条件如下：

净化柱：500mm×10mm，填装10g Bio Beads-X3填料，柱床高32cm；

流动相：体积比为1:1的环己烷和乙酸乙酯，流速为1.0mL/min；

样品定量环为1mL；预淋洗体积为17mL；洗脱体积为15mL；清洗体积为5mL；

取步骤（1）中制备的待净化液1mL通过凝胶渗透仪按上述条件净化，收集洗脱液于刻度离心管中；将收集到的洗脱液于45℃的水浴中氮气吹至近干，取0.2mL正己烷饱和的乙腈涡旋振荡溶解残余物，再加入0.5mL正己烷饱和的乙腈，涡旋振荡并静置分层，吸出乙腈层于2mL进样小瓶中，向刻度离心管中重复加入0.5mL正己烷饱和的乙腈操作一次，合并乙腈层，过0.22µm滤膜于气相色谱-串联质谱仪的进样小瓶中，制得待测样品溶液，供气相色谱-串联质谱测定；

步骤（3）：标准曲线的配制：取克霉唑标准品10mg，用乙腈溶解并转移至100mL容量瓶中，用乙腈定容，制得100µg/mL克霉唑标准储备液；取d5-克霉唑标准品1mg，用乙腈溶解并转移至10mL容量瓶中，用乙腈定容，制得100µg/mLd5-克霉唑标准储备液；各取100μg/mL的克霉唑和d5-克霉唑标准储备液0.1mL，分别用乙腈稀释定容至10mL，配制成1.0 µg/mL的克霉唑和d5-克霉唑标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：各取1、2、5、20、50、100µL的1.0µg/mL克霉唑标准工作液，分别加入20µL的1.0µg/mLd5-克霉唑溶液，再各加入979、978、975、960、930、880 µL乙腈，制得1、2、5、20、50、100 µg/L的系列浓度标准曲线溶液，其中d5-克霉唑同位素内标溶液浓度均为20µg/L；

步骤（4）：待测样品溶液的检测：将步骤（2）中制备的待测样品溶液和步骤（3）中制备的标准曲线溶液在气相色谱-串联质谱仪上分别进样，所述气相色谱-串联质谱的参数条件如下：

色谱柱：HP-5ms，30m×0.25mm×0.25μm，程序升温：60℃，1min 200℃ 300℃，7min；进样量：1μL；载气：高纯氦气，纯度≥99.999%，流量1.0mL/min；进样量口温度：240℃；碰撞气：高纯氩气，纯度≥99.999%；离子源温度：300℃；质谱传输线温度：280℃；监测模式：多反应监测MRM，MRM离子对及电压如下表所示，表中*标记为定量离子对；

克霉唑和d5-克霉唑的多反应监测参数

根据标准曲线对定量离子进行内标法定量计算，获得待测样品溶液中克霉唑的浓度，继而获得动物源食品中克霉唑的含量。

2.根据权利要求1所述的一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中净化方式中，待净化液采用凝胶渗透仪净化除去80%以上的脂肪和其他杂质，再采用液液萃取除去剩余的脂肪。