[发明专利]一种抗PD-L1单克隆抗体以及在制备抗癌药物方面的应用

说明书

本发明公开了一种抗PD‑L1单克隆抗体，通过使用PD‑L1蛋白免疫小鼠，确定免疫成功后，分离出小鼠脾脏，提取总RNA，反转录为cDNA，通过PCR扩增出抗体轻、重链基因，然后构建单链抗体噬菌体库，通过筛选获得目标抗体。本发明从噬菌体抗体库筛选出的抗PD‑L1单克隆抗体对PD‑L1具有良好的亲和力，并能够抑制PD‑L1和PD‑1的结合。该抗PD‑L1单克隆抗体进一步人源化后作为免疫检查点抑制剂，可用于癌症及感染性疾病的治疗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种抗PD-L1单克隆抗体，本发明还涉及该抗体在制备抗癌药物方面的应用。

背景技术

癌症被称为世界五大绝症之一，全世界对癌症治疗的探索从未中断过，但时至今日，癌症治疗依旧是世界性难题，给社会和患者（包括其家庭）造成了巨大的经济压力。癌症病变的基本单位是癌细胞，无止境增生的癌细胞使患者体内的营养物质被大量消耗，同时癌细胞还能释放出多种毒素，使人体产生一系列症状，如果发现和治疗不及时，它还可转移到全身各处生长繁殖。传统治疗癌症的手段包括放化疗、手术等，但治疗效果远不能令人满意。近年来兴起的免疫治疗方法依靠其突出的表现已成为癌症治疗的标准方法，其原理是通过调控患者的免疫应答，以增强自身免疫系统杀伤肿瘤细胞的能力。

免疫治疗方法主要集中在三个方面：一是免疫检验点的阻断；二是过继性细胞疗法；三是癌症疫苗。免疫检验点是机体防止过度激活免疫系统的抑制途径，对于维持自身耐受至关重要。肿瘤细胞利用某些免疫检验点避免被 T 细胞杀伤，

PD-1/PD-L1 是经常被利用的检验点之一，肿瘤细胞通过表达PD-L1与T细胞表面的PD-1结合从而避免被肿瘤细胞识别和杀伤，因此阻断 PD-1 和 PD-L1 的结合对解除免疫系统的抑制有重要意义。

程序性死亡受体-1 (Programmed Death receptor-1， PD-1) ，由TasukuHonjo及其同事在1992年首次报道，并提出PD-1与程序性凋亡有关。现在发现PD-1是一种跨膜蛋白，参与免疫检查点，在T细胞和祖B细胞表面广泛表达。PD-L1（B7-H1，CD274）是PD-1的配体，PD-L1大小为40KD，在多种造血细胞和非造血细胞上诱导表达。PD-1是CD28 / CTLA-4 /ICOS共刺激受体家族成员，可提供对淋巴细胞免疫有深远影响的负信号，调控免疫应答。研究表明，可以通过破坏PD-1和PD-L1之间的结合来增强T细胞杀伤能力，使肿瘤部位T细胞和IFN-γ增加，有利于形成抗肿瘤微环境。

目前，国外已上市的PD1和PD-L1药物总共有6种，其中PD-1药物3种，PD-L1药物3种。2014年Nivolumab（纳武利尤单抗，商品名：Opdivo，欧狄沃）获批上市，成为第一个PD-1抑制剂，用来治疗晚期黑色素瘤，开启了此类药物的飞速发展时代。另两个PD-1药物分别为为Pembrolizumab（帕博利珠单抗，商品名：Keytruda，可瑞达）和Cemiplimab（商品名：Libtayo）。PD-L1药物有Atezolizumab（阿特珠单抗，商品名：Tecentriq），Duravulumab（商品名：Imfinzi），Avelumab（商品名：Bavencio）。这些药物被用于治疗多种类型的癌症，包括黑素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，尿路上皮癌，肝细胞癌，胃癌，结肠直肠癌，头颈癌，Merkel细胞癌和霍奇金淋巴瘤。Nivolumab和Pembrolizumab也已在我国上市，同时我国国内研发的特瑞普利单抗（商品名：拓益）和信迪利单抗（商品名：达伯舒）两种PD-1抗体，也于同一时间在国内获批上市，但国内暂时没有PD-L1抗体药物上市。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗PD-L1单克隆抗体，本发明还提供该抗体在制备抗癌药物方面的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的抗PD-L1单克隆抗体，其轻链序列和重链序列如下：

轻链序列：