[发明专利]个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用

权利要求书

1.一种个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，包括以下步骤：

(1)草莓土壤样本处理：将采样的草莓连作的根际鲜土壤，去除根茬残体及其它杂物质，经粉碎、过筛，为除杂土。对样本进行粗处理，称量、测定样本PH值。抽提并纯化样本中的微生物DNA，采用515F/806R PCR引物对微生物DNA的16S rRNA基因的V3-V4高变区进行扩增；

(2)测定草莓土壤中微生物总量：提取土壤中微生物的总DNA，然后以16S rRNA作为目标序列，使用515F/806R PCR引物进行绝对定量，以大肠杆菌作为标准品；

(3)鉴定草莓土壤中微生物菌群比例：通过高通量基因测序技术对扩增的产物进行测序，对测序结果进行分析评估，将测序结果与16S rRNA的微生物基因序列数据库进行对比，确定土壤样本中不同活性微生物菌群的相对含量和比例；

(4)确定菌剂配方：购买国家微生物菌种库保存的一株编号为ACC10013的胶质芽孢杆菌，和一株编号为ACC11025的枯草芽孢杆菌。将测定的微生物菌群含量与该地区草莓土壤微生物数据库中该微生物菌群的含量分布进行比较，通过构建具有自主知识产权的草莓种植土壤生物信息数据库，确定自主应用的草莓土壤的配方。若相对含量≤25％，则提供的菌剂配方中该微生物菌群的活性含量不低于5.3×10⁹cfu/g(mL)；若相对含量＞25％，则提供的菌剂配方中该微生物菌群的活性含量不低于1.5×10⁹cfu/g(mL)；

(5)微生物肥料发酵：将步骤4中已经确定的菌剂配方与发酵基质混合均匀后发酵，发酵环境中密闭发酵保持10-15天当发酵基质的pH值到达或接近5.0时，则发酵成熟。

2.按照权利要求1所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：在提取样本中的微生物DNA的过程中采取微珠打碎或者是超声的提取方法。

3.按照权利要求1或2所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：采用的515F/806R PCR引物为515F-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA,806R-GGACTACHVGGGTWTCTAAT。

4.按照权利要求1所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：草莓土壤中的微生物菌群包括光合菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌群、放线菌群、丝状菌群、枯草芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、双歧杆菌、木霉菌、黑曲霉菌、放线菌、解钾菌、解磷菌、固氮菌、有益革兰氏阳性细菌、纤维素分解菌等多种菌群的配方，按照草莓的具体生长环境配制而成。

5.按照权利要求1所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：通过选择草莓种植土壤样本中常见多种菌株16S rRNA的微生物基因序列的测定，参照公共数据库(RDP、SILVA、GreenGene、UNITE)菌株的系统分类名称和DNA序列信息，构建具有自主知识产权的草莓种植土壤生物信息数据库分析和管理平台的方法。

6.按照权利要求4所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：草莓土壤微生物数据库的建立方法为：通过高通量测序获得某一地区的大量草莓土壤样本中微生物组成分布比例信息。

7.按照权利要求1或4所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：发酵基质主要是无毒的植物的根、茎、叶、果实，包括果树、蔬菜、菌菇类、以及一些草本植物。

8.按照权利要求7所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：发酵基质中包括35％的水和15-20％的蔗糖，质量分数。

9.按照权利要求8所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：所述蔗糖是一种颜色较深、没有经过高度提取精炼的成品糖，主要有黑糖和红糖。

10.按照权利要求7或8所述的个性化解决草莓连作障碍的符合微生态菌剂的制备技术及使用，要点在于：步骤(5)中发酵过程为：在25-35℃的温度下发酵7d后，没有大量气体产生时，密封发酵罐至少保持10-15d；当温度稳定后，且pH到达或接近5.0时显示发酵成熟，并冷却；发酵结束，过滤分离后得到固态和液态微生物肥料。